二丁颗粒抗肠道病毒71型作用的体内外实验研究

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研究背景及目的:肠道病毒71型(enterovirus71, EV71)为小RNA病毒科肠道病毒属的成员,是引起手足口病(Hand, Foot and Mouth Disease,HFMD)的主要病原体。EV71型手足口病常会并发神经源性肺水肿、无菌性脑膜炎、脑干脑炎、心肌炎、急性驰缓性麻痹等中枢神经系统疾病,致残率和死亡率较高。目前尚无行之有效的抗EV71病毒药物、疫苗和治疗手段。二丁颗粒是由紫花地丁、半边莲、蒲公英和板蓝根4味药材制成的中药复方制剂,具有清热解毒的功能。本研究将对其体内外抗EV71作用、免疫调节作用等方面进行研究。材料及方法:体外实验:采用MTT比色法测定二丁颗粒及阳性对照药物(利巴韦林)对Vero细胞的毒性作用,非线性回归构建各药物剂量与毒性效应关系曲线,计算最大无毒浓度(TC0)和半数毒性浓度(TC50);MTT比色法测定二丁颗粒对EV71致细胞病变(CPE)的抑制作用,计算最大无毒浓度下,各药物对病毒的抑制率。体内实验:采用腹腔注射肠道病毒71型感染5日龄Balb/c乳鼠,建立EV71实验动物模型,并分别用二丁颗粒和利巴韦林进行治疗,连续观察14天,统计各组体重和临床评分,计算各组死亡率和生命延长率。于感染后6天,取乳鼠血清和肌肉组织,流式液相多重蛋白定量技术检测各组乳鼠血清中炎症因子的含量;Real-time PCR检测肌肉组织中EV71的病毒载量;HE染色进行肌肉组织病理学检测。实验结果及结论:体外实验结果显示,二丁颗粒对Vero细胞最大无毒浓度(TC0)为2.56mg/ml,半数毒性浓度(TC50)为16.74mg/ml;利巴韦林颗粒对Vero细胞最大无毒浓度(TC0)为1.58mg/ml,半数毒性浓度(TC50)为18.17mg/ml。二丁颗粒在最大无毒浓度下,对EV71抑制作用不明显,差异无统计学意义。体内实验结果显示,二丁颗粒各剂量组可不同程度提高EV17模型乳鼠的生存率和生存时间;增加体重,降低临床评分;降低乳鼠血清中IL-6、TNF-α、IFN-γ、MCP-1的含量,减轻炎症反应,改善组织病理。二丁颗粒治疗并不能明显抑制EV71在乳鼠肌肉中扩增,模型乳鼠生存状态和生理指标的改善可能与二丁颗粒抑制细胞炎症因子的免疫调理作用有关。
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