【摘 要】
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目的:本课题采用大鼠自主饮用呋喃唑酮水溶液制作扩张型心肌病大鼠模型,AngⅡ诱导心肌成纤维细胞转分化建立细胞模型,基于SIRT3/β-catenin/PPARγ信号通路探讨抗纤益心方对扩张型心肌病心肌纤维化的影响。方法:1.抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌纤维化的影响:采用Wistar大鼠自主引用呋喃唑酮水溶液制作扩张型心肌病大鼠模型,造模结束后超声心动图检测大鼠心功能,以确定造模是否成功。造模成
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目的:本课题采用大鼠自主饮用呋喃唑酮水溶液制作扩张型心肌病大鼠模型,AngⅡ诱导心肌成纤维细胞转分化建立细胞模型,基于SIRT3/β-catenin/PPARγ信号通路探讨抗纤益心方对扩张型心肌病心肌纤维化的影响。方法:1.抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌纤维化的影响:采用Wistar大鼠自主引用呋喃唑酮水溶液制作扩张型心肌病大鼠模型,造模结束后超声心动图检测大鼠心功能,以确定造模是否成功。造模成功的大鼠随机分为模型组、抗纤益心方低、中、高剂量组和卡托普利组,分别给予药物灌胃治疗,模型组灌胃与治疗组同等容积的生理盐水,正常组大鼠常规饲养,不进行药物干预。药物治疗结束后,再次超声心动图检测大鼠心功能,进行大鼠心脏取材,HE染色、Masson染色观察大鼠心肌组织病理变化,RT-PCR、Western blot检测纤维化相关指标及SIRT3的基因及蛋白表达水平。2.抗纤益心方抑制心肌成纤维细胞转分化与SIRT3/β-catenin/PPARγ信号通路的关系:取新生SD大鼠心脏分离心肌成纤维细胞进行体外培养,免疫荧光鉴定细胞纯度,RT-PCR检测AngⅡ诱导细胞转分化的最佳浓度,免疫荧光检测AngⅡ诱导细胞转分化是否成功,CCK-8检测抗纤益心方干预细胞的最适浓度,RT-PCR、Western blot检测纤维化相关及SIRT3/β-catenin/PPARγ通路相关基因及蛋白表达水平。3.抗纤益心方抑制扩张型心肌病大鼠心肌纤维化与SIRT3/β-catenin/PPARγ信号通路的关系:取大鼠心肌组织,RT-PCR、Western blot检测β-catenin、PPARγ的基因及蛋白表达水平。结果:1.抗纤益心方显著缩小扩张型心肌病大鼠LVEDD、LVESD,显著增高LVEF、LVFS,改善心功能。2.抗纤益心方明显抑制扩张型心肌病大鼠心肌病理损害,抑制心肌间质胶原纤维增生。3.抗纤益心方有效降低心肌纤维化相关因子α-SMA、collagenⅠ、TGF-β1蛋白及基因表达。4.抗纤益心方浓度为0.25 mg/m L时,心肌成纤维细胞成活率最高。5.AngⅡ浓度为10-7mol/L时诱导心肌成纤维细胞转分化效果最佳。6.抗纤益心方明显升高心肌肌成纤维细胞SIRT3、PPARγ基因及蛋白表达,降低β-catenin基因及蛋白表达。7.抗纤益心方明显升高扩张型心肌病大鼠心肌组织SIRT3、PPARγ基因及蛋白表达,降低β-catenin基因及蛋白表达。结论:1.抗纤益心方能够有效改善DCM大鼠心功能,抑制心肌病理损害及胶原纤维的异常增生,抑制心肌纤维化,可能与激活SIRT3及PPARγ、抑制β-catenin的表达有关;2.抗纤益心方可以通过激活SIRT3及PPARγ、抑制β-catenin的表达抑制CFs转分化,从而抑制心肌纤维化进程。
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