培养基成分对植物乳杆菌LIP-1抗冷冻活性影响及其蛋白组学研究

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本文以植物乳杆菌LIP-1为研究对象,在MRS培养基的基础上,通过改变培养基的成分及含量,探究培养基成分的变化对植物乳杆菌LIP-1抗冷冻干燥活性的影响,并以高密度发酵活菌数及冷冻干燥存活率为指标优化出最佳培养基;在此基础上,选取经不同培养基培养,发酵活菌数相似,但冻干存活率存在显著差异的两组植物乳杆菌LIP-1进行蛋白组学比较分析,以探讨不同培养基成分对其抗冷冻性影响的作用机理。单因素和响应面法的实验结果显示,培养基成分对植物乳杆菌LIP-1的冷冻干燥活性有显著的影响,得到优化培养基的成分如下:蔗糖33.35 g/L,复合氮源(大豆蛋白胨/酵母粉/酪蛋白胨质量比为3:3:5)10.80 g/L,磷酸氢二钾/乙酸钠/柠檬酸钠(质量比1:2.5:1)14.85 g/L,MgSO4 0.2 g/L、MnSO4 0.12 g/L,L-半胱氨酸50 mg/L和VB140 mg/L。用优化培养基培养的菌株发酵活菌数为9.892 logCFU/mL,冷冻干燥存活率为77.94%,均显著高于MRS基础培养基(p<0.05)。在此基础上,冻干存活率存在显著差异的两组植物乳杆菌LIP-1的蛋白组学分析结果显示,与冻干存活率低的对照组相比,差异蛋白共145个,其中上调蛋白99个,下调蛋白46个。GO富集分析结果显示,优化培养基条件下菌株细胞的代谢与生物调节显著上调。KEGG通路富集结果显示,嘌呤代谢通路是上调差异最显著的代谢通路,其次是脂肪酸合成及代谢通路。以上结果表明,培养基成分可以对植物乳杆菌LIP-1的抗冷冻干燥性能产生显著影响,优化后的培养基不仅提高了菌株的发酵活菌数还提高了其冻干存活率。利用蛋白质组学分析培养基成分提高菌株冻干存活率的内在原因,结果发现优化培养基通过改善菌株嘌呤代谢能力、影响细胞膜脂肪酸的合成和提高冷应激蛋白cspC的表达等方式,提高细胞膜流动性、增强了菌株的生长繁殖能力、减少冻干损伤从而提升菌株的抗冷冻干燥性能。据此,本研究为乳酸菌抗冷冻干燥性的研究提供了重要的科学依据,为促进我国乳酸菌发酵剂的工业化生产奠定了一定的理论基础。
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