兰花(Cymbidium spp.)清幽脱俗极具观赏价值和收藏价值,近年来,随着社会的进步,兰花越来越受到人们的重视,同时,兰花也是是广东顺德等地的高效创汇产业。但是,病毒病严重危害着兰花产业的发展。兰花病毒病可造成兰花花叶、坏死以及花朵变色和畸形,严重影响其品质,其中建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是造成兰花经济损失的主要病毒之一。本研究获得了三个建兰花叶病毒分离物,分别标记为Cym MV-GDFS1、Cym MV-GDFS2、Cym MV-GDFS3。三个分离物基因组全长序列分别由6227、6222、6224个碱基组成,各包含5个开放阅读框,分别为4254bp的RdRp、702bp的TGB1、339bp的TGB2、276bp的TGB3、以及672bp的CP基因。对这三个分离物的的全基因组核苷酸序列相似性进行分析,结果表明CymMV-GDFS1与Cym MV-GDFS2相似性最低为98.1%,Cym MV-GDFS2与CymMV-GDFS3相似性为98.5%,CymMV-GDFS1与Cym MV-GDFS3相似性最高为99.3%。与已报导的其它12个CymMV全长序列相比较,相似性在87.3%-97.3%之间;与Hawaii的两个分离物Cym MV-18-30、Cym MV-18-1的相似性都较低,分别为87.3%与88.5%;而与除此之外的其它10个分离物的相似性在96%-97.3%之间。这三个Cym MV CP基因序列与54个国内Cym MV CP序列相比较,核苷酸与氨基酸的相似性分别为86%-99%、91%-100%;与57个国外Cym MV CP序列相比较,核苷酸与氨基酸的相似性分别为88%-99%、90.5%-100%。根据111个Cym MV CP序列分别构建核苷酸和氨基酸系统进化树,核苷酸进化树分析表明CymMV-GDFS1与CymMV-FS4亲缘关系最近,而CymMV-GDFS2、Cym MV-GDFS3与Cym MV-DEK30亲缘关系最近;氨基酸进化树表明CymMV-GDFS1与Cym MV-FS4亲缘关系同样最近、CymMV-GDFS3与Cym MV-ZH2亲缘关系最近、Cym MV-GDFS2与CymMV-C-LZ02亲缘关系最近,而三个分离物之间亲缘关系较远。这三个分离物RdRp序列与已报导的12个Cym MV RdRp序列相比较,相似性为87.3%-97.9%。本研究通过分段克隆的方法将获得的三个Cym MV分离物成功地连接到改造后的植物双元表达载体pCAMBIA2300,构建了含有Cym MV病毒序列的侵染性克隆,通过农杆菌介导分别接种本生烟,接种40天后,本生烟表现病毒性的侵染症状,利用RT-PCR和ELISA都能从本生烟叶片中检测到Cym MV。初步证明构建的侵染性克隆具有生物学活性,可以成功地侵染本生烟。在构建侵染性克隆的基础上,通过酶切连接将绿色荧光蛋白GFP序列连接到含有Cym MV病毒的侵染性克隆表达载体上。通过农杆菌介导瞬时表达分别接种本生烟,三天后用共聚焦显微镜观察本生烟叶片,发现病毒主要聚集在叶表皮细胞壁与细胞核周围。