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中医从整体观出发,认为人是“形神”的统一体,各种生命活动由神来主导,而情志是神基于脏腑、经络、气血的外在体现。由于情志在疾病的发生发展中起着不可忽视的作用,中医特别注重调“神”。针灸作为中医的特色疗法,通过针刺腧穴,激发经络之气,从而调整机体的失衡状态,具有整体效应,能达到“身心同调”的目的。肠易激综合征(IBS)是典型的身心疾病,临床多选用天枢、足三里、内关等穴,以组方的形式用于治疗IBS,具有良好的疗效。“天枢”穴为局部取穴,主治胃肠道疾病;“内关”、“足三里”穴均为远端取穴,都能身心同调又各有侧重,从现代医学角度来看,三穴属于不同的神经节段;那么,这三个穴对于IBS大鼠痛情绪的影响是否存在差异呢?目的本实验以IBS大鼠为研究媒介,通过观察电针不同穴位对ACC神经元放电及NMDA受体表达的影响,并结合行为学进一步探讨电针不同穴位对IBS模型大鼠痛情绪的影响、差异及可能的作用机制。方法采用Wistar大鼠制备IBS模型,在造模前将其随机分为空白对照组(以下简称空白组)和模型制备组。除空白组外,均采用新生期“母子分离+醋酸灌肠”并联合“结直肠扩张刺激”法制备IBS大鼠模型。造模结束后,将模型制备组随机分为模型组、内关组、天枢组、足三里组。大鼠9周龄时治疗组分别给与电针干预,频率2/100 Hz,留针20分钟,隔日一次,共5次。治疗结束后,采用腹部回撤反射对大鼠进行内脏敏感性评估,观察潜伏期及收缩波个数;采用旷场实验评估大鼠情绪心理行为,观察其水平及垂直运动次数;采用在体多通道同步记录技术观察大脑ACC神经元放电变化;并用免疫组化和荧光定量PCR分别检测结肠及ACC内NMDA受体的表达。结果1.电针不同穴位对IBS模型大鼠行为学的影响1)电针不同穴位对IBS模型大鼠腹部回撤的影响与空白组比较,模型组大鼠的潜伏期明显缩短、收缩波个数均明显增多(P<0.01)。与模型组比较,治疗组的潜伏期均明显延长(P<0.01),天枢组与足三里组收缩波个数明显减少(P<0.01)。与天枢组比较,足三里组收缩波个数增多(P<0.05),内关组收缩波个数明显增多(P<0.01),且内关组潜伏期短于天枢组(P<0.05)。2)电针不同穴位对IBS模型大鼠旷场实验的影响与空白组比较,模型组大鼠的水平运动次数以及垂直运动次数均明显减少(P<0.01)。与模型组比较,内关组大鼠的水平运动次数明显增加(P<0.01)、垂直运动次数增加(P<0.05);足三里组仅水平次数增加(P<0.05)。与内关组比较,天枢组水平运动次数增加(P<0.05)。2.电针不同穴位对IBS模型大鼠ACC神经元放电的影响与空白组比较,模型组抑制性神经元放电频率减少(P<0.05),兴奋性神经元放电频率明显增加(P<0.01)。与模型组比较,在抑制类神经元中,内关组与足三里组的放电频率均增加(P<0.05);在兴奋性神经元中,三组的放电频率均明显减少(P<0.01)。3.电针不同穴位对IBS模型大鼠NMDAR的影响1)电针不同穴对IBS模型大鼠ACC核团内NMDAR相对含量表达的影响与空白组比较,模型组大鼠NR1、NR2A均明显增加(P<0.01),NR2B增加(P<0.05)。与模型组比较,内关组NR1、NR2A、NR2B均减少(P<0.01,P<0.05),足三里组NR1、NR2B 减少(P<0.05);天枢组仅 NR1 减少(P<0.05)。2)电针不同穴位对IBS模型大鼠结肠NMDAR免疫反应物阳性表达的影响与空白组比较,模型组大鼠结肠内NRI与NR2B免疫反应物阳性表达都明显增加(P<0.01)。与模型组比较,治疗组大鼠结肠内NR1免疫反应物阳性表达均减少(P<0.05),其中足三里组呈明显减少(P<0.01);NR2B免疫反应物阳性表达中天枢组与足三里组均减少(P<0.05),内关组虽减少,但不具有统计学差异。结论1.IBS模型大鼠腹部疼痛敏感性增高,情绪心理行为表现异常,符合IBS的病理特征,表明“母子分离加醋酸灌肠结合结直肠球囊扩张”刺激可以成功制备IBS大鼠模型。2.电针“内关”、“天枢”、“足三里”穴均可降低IBS模型大鼠肠道敏感性、缓解躯体疼痛症状,改善异常精神情绪行为。但缓解IBS腹痛的作用,天枢穴>足三里穴>内关穴;改善痛情绪的作用,内关穴>足三里穴>天枢穴。三穴效应的差异性可能与其穴位主治及神经节段分布的不同有关。3.大鼠在IBS模型状态下,ACC脑区抑制类神经元放电频率减少,兴奋性神经元放电频率增加；电针后,2类神经元放电频率均趋于正常组,其整体作用趋势为内关穴>足三里穴>天枢穴。结果表明ACC脑区的神经元活动状态异常与IBS模型有关,并且电针缓解痛情绪的中枢机制可能与调节ACC脑区神经元放电有关。4.在IBS模型状态下,中枢ACC及结肠内NMDA受体含量表达均增高,而电针后,其含量表达减少,且在ACC的调节作用为内关穴>足三里穴>天枢穴;在外周的调节作用为足三里穴>天枢穴>内关穴。结果表明NMDA受体与可能是介导IBS内脏痛与痛情绪的重要因子,电针能够通过下调NMDA受体的含量缓解IBS腹痛与痛情绪。