目的:脑血管疾病是引起人类致死致残的主要病因之一,分出血性和缺血性两大类,以缺血性临床最为常见。脑血管病中医称之为“中风”,中医药治疗常具有较好的疗效,尤其是缺血性中风。学者普遍认为瘀血阻滞是造成缺血性中风的主要病因病机,因而活血化瘀法为其基本治疗方法。但研究发现大多数的活血化瘀中药并不能通过血脑屏障(blood-brain barrier,BBB),从而影响其脑内的血药浓度(Plasma Concentration),进而影响其对中风治疗的疗效。实验证实开窍类中药易于透过BBB并且能够促使其他类药物透过BBB进入组织内部,那么开窍药配伍活血药能否促进活血药转运进入脑组织内部发挥协同增效作用进而对脑缺血损伤产生积极影响呢?本研究采用临床常用的开窍药冰片配伍中风中常用的活血药红花,通过大脑中动脉脑缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠模型,探讨冰片配伍红花对脑缺血损伤的作用并研究其作用机制,为脑缺血损伤的临床治疗提供新的治疗思路和理论实验依据。方法:雄性SD大鼠132只随机分为6组:假手术组、模型组、冰片组(0.03g/kg)、红花组(5 g/kg)、冰片配伍红花组(冰片0.03 g/kg+红花5 g/kg)、尼莫地平组(0.01 g/kg),其中用于TTC染色每组8只,HE染色和免疫组化检测共用每组8只,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法每组6只。线栓法制备MCAO大鼠脑缺血模型,术后2 h灌胃给药,之后每日1次,连续7 d;假手术组和模型组灌服等剂量的生理盐水,每日1次,连续7 d。检测如下指标:1)神经功能评分:造模大鼠清醒后1 h,参考Zea Longa的5级4分评分标准,进行神经行为学评分;评分1~3分者,纳入后续实验;用药7 d后再次进行神经功能评分。2)脑皮层脑血流量检测:用药7 d,大鼠麻醉后暴露颅骨部位,双波长激光多普勒血流仪检测大鼠的大脑皮层脑血流变化。3)脑梗死范围的检测:大鼠断头取脑,连续冠状切片,TTC染色,图像采集并应用图像分析系统测量脑梗死面积。4)脑组织病理形态学观察:常规方法制作脑组织石蜡切片,HE染色,观察大鼠神经细胞的形态变化,采集图像并进行分析。5)免疫组化法检测MMP-2、MMP-9、ZO-1在缺血侧脑组织内的蛋白表达:制作脑组织石蜡切片,用免疫组化法检测脑组织与血脑屏障相关蛋白MMP-2、MMP-9、ZO-1的表达。6)RT-PCR法检测大鼠缺血侧脑组织内的MMP-9、Claudin-5的mRNA表达:大鼠麻醉后迅速断头取脑,取缺血侧大脑顶叶皮层,用常规方法提取大脑皮层总RNA,用RT-PCR法检测MMP-9、Claudin-5的mRNA表达。结果:1)对神经功能评分及脑梗死范围的影响与假手术组相比,模型组大鼠的神经功评分显著升高(P<0.01),具有明显的白色梗死灶。与模型组相比,各用药组均能显著降低神经功能评分,减小脑梗死范围(P<0.01或P<0.05),冰片配伍红花组对于脑梗死范围的改善优于单用冰片组和单用红花组(P<0.01)。2)对大脑皮层脑血流量的影响与假手术组相比,模型组大鼠大脑皮层脑血流量出现明显的血流阻断。与模型组相比,冰片配伍红花组的大脑皮层血流量阻断有明显改善,优于单用冰片组和单用红花组(P<0.01)。3)对脑组织病理形态的影响模型组大鼠脑组织细胞数量明显减少,神经元出现变性、坏死,核固缩,部分核仁消失,胞体变形。与模型组相比,各用药组脑组织病理形态均得到了不同程度的改善,其中冰片配伍红花组的形态改善最为明显。4)对脑组织MMP-2、MMP-9和ZO-1蛋白表达的影响模型组脑组织中MMP-2和MMP-9的表达显著增加(P<0.01),而ZO-1的表达则显著减少(P<0.01);与模型组比较,各用药组MMP-2和MMP-9的表达显著减少,ZO-1的表达显著增加(P<0.01或P<0.05),冰片配伍红花组尤为明显(P<0.01)。5)对脑组织MMP-9、Claudin-5的mRNA表达影响与假手术组比较,模型组MMP-9的mRNA表达明显增加,而Claudin-5的mRNA表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,MMP-9 mRNA在各给药组的表达显著降低,Claudin-5 mRNA的表达显著升高(P<0.05),冰片配伍红花组与单用冰片组、单用红花组相比有统计学差异(P<0.01)。结论:1)冰片配伍红花能够降低MCAO大鼠的神经功能评分,减少MCAO大鼠的脑梗死范围和大脑血流阻断,改善脑组织病理形态,具有脑保护作用,优于单用冰片组和单用红花组。2)冰片配伍红花的脑保护机制可能与下调脑组织MMP-2、MMP-9和上调ZO-1的蛋白表达,以及降低MMP-9和提高Claudin-5的mRNA表达,从而调节血脑屏障改善脑水肿有关。