松花粉的卵巢保护功效成分及其保护机制的探究

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松花粉是药食两用的纯天然花粉,不仅在中医药经方验方中被广泛使用,也在近年来被大量用于保健食品的开发中,目前已经被证实具有抗炎、抗氧化等功能。卵巢是女性重要的器官,卵巢功能的保全近年来被广泛关注。多种含有糖醛酸的植物多糖和具有抗氧化活性基团的酚类化合物已经被证实具有保护卵巢功能。松花粉中含有的酚类化合物与报道具有保护卵巢功能的酚类化合物结构相似,松花粉还含有多糖等其它各种可能具有卵巢保护功能的成分,然而松花粉及其提取物对卵巢功能的保护效果与其具体的作用机制却鲜有报道。为了拓宽松花粉的应用方向,本研究分别建立环磷酰胺诱导的大鼠卵巢早衰模型和大鼠自然衰老模型,从激素调节、抗氧化、抗凋亡和抗炎四种机制分析松花粉保护卵巢和延缓卵巢衰老的功能特性。在验证了松花粉的卵巢保护功能基础上,选择大鼠卵巢早衰模型,对比分析了由水提法、醇提法和超滤得到的含有不同分子大小成分的松花粉提取物对卵巢保护功效的区别,同步分析上述四种机制,以阐明松花粉中不同功效成分对于卵巢保护的功效和机制,为未来松花粉卵巢保护功能性产品的开发提供理论和技术依据。主要的研究内容与结果如下:首先,用高(1.5 g/kg BW)、中(1.0 g/kg BW)和低(0.5 g/kg BW)三个剂量的松花粉对环磷酰胺(60 mg/kg BW 1 d+10 mg/kg BW 14 d)诱导的卵巢早衰模型大鼠灌胃4周,实验结束后取大鼠卵巢和血清,对卵巢形态学、血清激素、卵巢抗氧化能力、抗凋亡能力和抗炎能力进行检测。结果表明,三个剂量松花粉均能够提高卵巢早衰大鼠的卵巢指数,促进卵泡正常发育;调节血清性激素、促性腺激素水平,提高卵巢储备能力;提高卵巢总抗氧化能力,提高卵巢抗氧化酶活性,减弱卵巢氧化损伤;降低颗粒细胞凋亡程度,提高卵巢抗凋亡蛋白表达,降低卵巢促凋亡蛋白表达;降低血清炎症因子水平。以上结果说明,松花粉对卵巢早衰大鼠的卵巢功能具有改善作用,且有量效关系。接着,用高(1.5 g/kg BW)、中(1.0 g/kg BW)和低(0.5 g/kg BW)三个剂量的松花粉对自然衰老模型大鼠(12月龄,有非正常动情周期)灌胃4周,实验结束后取大鼠卵巢和血清进行形态学、激素、抗氧化能力、抗凋亡能力以及抗炎能力的检测。结果表明,中、高剂量的松花粉能够提高自然衰老大鼠的卵巢指数,减少卵泡闭锁,延缓卵泡消耗;调节血清性激素、促性腺激素水平,一定程度提高卵巢储备能力;提高卵巢总抗氧化能力,提高卵巢抗氧化酶活性,减弱卵巢氧化损伤;降低颗粒细胞凋亡程度,提高卵巢抗凋亡蛋白表达,降低卵巢促凋亡蛋白表达;降低卵巢促炎因子水平,提高抗炎因子水平。结果表明,松花粉对自然衰老的大鼠有延缓卵巢衰老进程的效果,但是效果有限,与青年鼠相比卵巢状态仍有较大差距。在证实上述功能的基础上,为了探究松花粉保护卵巢的物质基础,用水和70%乙醇提取松花粉,进一步用超滤获得水提液中的大分子物质(分子量大于5 k Da)和醇提液中的小分子物质(分子量小于5 k Da),最终得到水提物、醇提物、大分子和小分子四种提取物,测定四种提取物中糖类物质和酚类化合物的组成与含量,并比较对卵巢早衰大鼠的卵巢保护作用的差异。结果表明,水提物中的活性物质主要为多糖和酚酸(没食子酸和间双没食子酸);大分子物质中的活性物质主要为多糖,且含量显著高于水提物,其单糖组成与水提物接近;醇提物中的活性物质主要为酚酸(香豆酰奎宁酸、咖啡酸、对香豆酸)和黄酮类化合物(花旗松素、柚皮素),并且含有极少的多糖;小分子中的各种酚类化合物含量均显著高于醇提物且鉴定出醇提物中未检出的原儿茶酸,其多糖含量更少。在探究不同提取物中的活性物质的卵巢保护功能实验中,从两种卵巢衰老模型中选取了松花粉保护效果更好的卵巢早衰模型作为给药对象,以四种提取物作为灌胃药物,对经前期动物实验选取的各项指标进行测定。结果显示:四种提取物均可以不同程度提高卵巢的功能,调节有关激素,提高卵巢抗氧化和抗炎能力,降低卵泡凋亡与闭锁,促进卵泡正常发育。醇提物和小分子有较强的卵巢保护功能。水提物的保护效果居中,大分子保护效果最差但是抗炎能力与其他三种提取物持平。上述研究结果结合提取物中活性成分的分子机制可得出推论,松花粉中的酚类化合物和松花粉多糖有都具有卵巢保护的功效,酚类化合物为主要的卵巢保护功效成分。
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