胃癌(gastric cancer)是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤。胃癌是全球癌症相关死亡的主要原因之一。许多患者在诊断时发现不适合进行手术,或在切除癌组织后屡次复发。胃癌在解剖学上分为胃腺癌和胃食管连接腺癌,在组织学上分为肠型和胃型(弥漫型)。目前为止手术是唯一的治疗方法。对于局部晚期胃癌,可以进行手术与其他辅助手段相结合的措施进行治疗。但在转移性胃癌中治疗效果较差,中位生存期仅约为1年。随着人们对靶向治疗的研究,靶向药物进入了人们的视野。据报道,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)异常高表达是包括胃癌在内的大多数肿瘤所共同具有的重要特征。VEGF主要作用于血管内皮细胞表面的受体Fit-1(fms-like tyrosine kinase-1,VEGFR-1)和KDR(kinase insert domains-containing receptor,VEGFR-2),从而诱导血管新生。在肿瘤的发展和转移过程中,血管新生是一个基本步骤,而VEGF是在这一过程中发挥作用的调节因子中最为重要的一个。研究表明,VEGF受体并不仅仅在血管内皮细胞内表达,它也可以在肿瘤细胞表达。RNA干扰技术是一种在小分子RNA的介导下启动细胞RNA诱导沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC),从而特异性地靶向并沉默特定的基因的技术。我们利用小干扰核糖核酸(si RNA)构建干扰质粒,将质粒导入实验动物体内,通过动物自身组织和器官分泌相应的小RNA,通过外泌体送入目标细胞,发挥靶向治疗的作用。本研究以胃癌为研究对象,探究VEGFR-si质粒能否通过干扰vegf的信号通路抑制肿瘤的血管生成,从而抑制肿瘤的生长和转移。研究计划分为以下几个方面:首先,我们针对血管内皮生长因子受体VEGFR设计si RNA,以pc DNA6.2质粒为载体,构建可表达VEGFR si RNA的VEGFR干扰质粒(VEGFR plasmid),利用胃癌低分化细胞系MKN-45验证VEGFR plasmid干扰效果,质粒转染24小时后收取总RNA及总蛋白,通过Western Blotting技术检测VEGFR蛋白水平表达,筛选出了最具效果(使VEGFR表达下调最多)的质粒;然后,我们在MKN-45细胞系中验证了VEGFR plasmid下调VEGFR表达后对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡功能的影响,我们通过细胞增殖实验和迁移实验验证了该质粒可有效抑制MKN-45细胞系的迁移和增殖,促进MKN-45细胞系的凋亡。最后,我们在动物水平上,构建小鼠胃癌原位模型,尾静脉给药VEGFR plasmid,每两天一次,给药一个月后评估VEGFR plasmid对肿瘤生长的抑制情况。结果显示VEGFR plasmid 20mg/kg组与Control plasmid组相比肿瘤增长速度有所减缓,生存期延长。综上,基于外泌体传输的新型小RNA载体递送体系,我们通过尾静脉注射VEGFR plasmid,利用动物体内肝脏作为生物反应器加工表达VEGFR si RNA,并通过肝脏细胞来源的外泌体将VEGFR si RNA包裹分泌至血液循环系统,输送至其他组织器官,发挥干扰受体细胞VEGFR基因表达的作用,为胃癌临床治疗及靶向药开发提供新思路。