第一部分NMDA诱导急性青光眼模型中视网膜视杆双极细胞损伤的特征目的:研究N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)诱导小鼠急性非高眼压性青光眼模型中视网膜视杆双极细胞损伤的特征。方法:随机选取3周龄的C57BL/6J小鼠,均以右眼为实验组、左眼为对照组,玻璃体腔内分别注射浓度为10mM的NMDA,建立视网膜兴奋损伤动物模型。在整体动物水平通过视网膜电图(electroretinogram,ERG)、在组织学水平通过视网膜冰冻切片免疫荧光染色、在细胞水平通过膜片钳技术,研究NMDA对小鼠视网膜视杆双极细胞损伤的特点。结果:玻璃体腔注射NMDA24小时后,RGC数量明显减少,视杆双极细胞胞体数量及其位于内丛状层(inner plexiform layer,IPL)的树突数量急剧减少。ERG显示a波和b波的潜伏期变化不大,但b波振幅明显下降。膜片钳给药结果表明,经过NMDA处理后的小鼠视网膜视杆双极细胞,其去极化电流被完全抑制。结论:玻璃体腔内注射NMDA可诱导RGCs的显著减少和视网膜视杆双极细胞的功能损害,与急性青光眼病理损害具有相似性,是一种新的青光眼的病理特征。第二部分NMDA诱导小鼠视网膜视杆双极细胞损伤的机制研究目的:探究NMDA诱导小鼠视网膜视杆双极细胞的损伤机制方法:随机选取3周龄的C57BL/6J小鼠,将其分为三组,均以右眼为实验组、左眼为对照组,在玻璃体腔注射10mM NMDA、NMDA(10mM)+KN93(1 nM)和NMDA(10mM)+MG132(20μg/ml)后,在组织学水平通过视网膜冰冻切片免疫荧光染色,在细胞水平通过膜片钳技术,研究KN93和MG132在NMDA损伤RBC中所起的作用。用ONX0912(200nM,30mg/kg)对小鼠进行灌胃5d后,在第4天时给小鼠右眼玻璃体腔注10 mM NMDA 3 μl,之后取视网膜进行免疫荧光染色。通过在膜片钳下取出的单细胞进行聚合酶链式反应检测单个视杆双极细胞中PKC、TRPM1、Go等G蛋白信号通路相关指标的mRNA水平。分别用前房灌注和视神经钳夹两种方法造模,在相应时间取视网膜进行免疫荧光染色,观察视网膜中RBC的情况。结果:NMDA在诱导视网膜RGCs急性凋亡的同时,视杆型双极细胞内出现功能性PKCα表达量减少的现象;CaMK Ⅱ抑制剂KN93可翻转NMDA对RBC的损伤作用,蛋白酶体抑制剂MG132和ONX0912也有同样的作用。单细胞rt-PCR 检测 NMDA 实验组中 PKC、TRPM1、Gβ3、RGS7、Gβ5 的 mRNA 含量较正常组含量降低,mGluR6、Gαo、GPR179、RGS11、GDIA、GDIB、GDIG的mRNA含量较正常组含量升高,差异均具统计学意义。在前房灌注和视神经钳夹这两种青光眼模型中,也观察到了 RBC的损伤现象。结论:玻璃体腔内注射NMDA在诱导急性RGCs凋亡,并且这种损伤是通过升高或者下调G蛋白信号通路上的相关蛋白和微调蛋白实现的,可通过细胞内CaMK Ⅱ和蛋白酶体影响视杆型双极细胞的生理功能。RBC在不同的青光眼模型中的损伤现象具有一定的普遍性。