论文部分内容阅读
目的:通过构建出的急性酒精肝损伤模型,探究出乳源六肽PGPIPN在降低急性酒精性肝损伤方面的药理学作用。方法:1,构建小鼠急性酒精肝损伤的动物模型,健康的雄性昆明种小鼠60只,体重18-22g。动物预饲养一周,然后分成6组(对照,模型,PGPIPN I,PGPIPN II,PGPIPN III和GSH),每组10只小鼠。为了制作小鼠的急性酒精肝的动物模型,实验最后3天,PGPIPN低、中、高剂量组、GSH组和模型对照组以体积分数为56%的乙醇进行灌胃,对照组使用等量蒸馏水灌胃,建立小鼠的急性酒精肝损伤的对照模型。12 h后,将小鼠麻醉处理,取材检测相关指标。在实验结束时,将小鼠称重并麻醉,收集血清和肝脏样品,称重(肝脏)并保存,计算出肝脏指数。同时,测定小鼠血清中AST和ALT含量,血清和肝匀浆中TG和TC的含量。取肝脏组织制作成病理切片,观察肝脏细胞的病理学变化,Western blot检测相关蛋白的表达情况。2,将实验室冻存的LO2细胞复苏,建立急性酒精肝损伤的肝细胞模型,将LO2细胞分组(对照,模型,PGPIPN I,PGPIPN II,PGPIPN III和GSH),流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测相关蛋白的表达情况。3,原代细胞的培养,分成6组(对照,模型,PGPIPN I,PGPIPN II,PGPIPN III和GSH),测定MTT结果,比较各组细胞的凋亡情况。结果:生化分析显示模型组小鼠血清TG、TC和肝脏TG(肝匀浆中TG的浓度)高于对照组,血清中PGPIPN H剂量组、PGPIPN M剂量组和PGPIPN L剂量组中ALT、AST含量与模型组相比降低,PGPIPN高剂量组中TNF-α含量较模型组也有减少,肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性增强,丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平显著下降。对照组中,肝细胞结构完整,凋亡指数为3.61%。而模型组中肝索结构紊乱,液泡数目增加,肝脏细胞的边界不清晰,细胞核消失,细胞皱缩,凋亡指数为36.87%,出现了明显的细胞凋亡状态。PGPIPN L剂量组细胞出现凋亡状态,而PGPIPN H剂量组细胞状态良好,无凋亡现象发生。流式细胞术检测细胞凋亡,对照组为4.558%,模型组为31.50%。原代细胞MTT显示,酒精组凋亡明显,PGPIPN H凋亡较少。结论:乳源六肽PGPIPN能够预防和降低小鼠急性酒精性肝损伤。