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目的（1）对淋巴细胞亚群计数自制参考物质（百分计数和绝对计数）进行评价,将其应用于检测系统性能验证和室内质量控制研究,为其在临床实验室的大规模推广应用奠定基础。（2）对参加CD34+造血干细胞计数全国室间质量评价的实验室进行问卷调查和质评数据分析,以了解临床实验室开展CD34+造血干细胞计数的现状及存在的问题,为制定和实施质量改进方案提供参考依据。方法（1）淋巴细胞亚群计数自制参考物质的评价与应用研究:①自制参考物质的评价:依据ISO Guide 35和JJF1343-2012指南文件,对Lym202001和Lym202002两个批号淋巴细胞亚群计数自制参考物质百分和绝对计数的均匀性和稳定性进行评估,联合9家临床实验室对其百分和绝对计数进行定值;②自制参考物质在性能验证中的应用:A.精密度验证:参考ICSH和ICCS、CLSIH62等指南文件,批内精密度使用1份自制参考物质、2份进口质控品和3份新鲜临床标本,在一个实验批内,每份标本分别标记3次,每管重复上机检测3次;日间精密度验证方案见室内质量控制应用,将室内质控结果的变异系数（CV）与厂家说明书和基于生物学变异（BV）数据计算的不精密度质量规范指标进行比较;B.线性范围验证:参考EP6-A指南文件,使用自制参考物质进行浓缩稀释配制出不同浓度梯度的标本进行线性范围验证,同时采用WS/T 420-2013和EP6-A评价方法对验证结果进行评价。C.正确度验证:参考EP15-A3指南文件,在同一实验批内,分别对已定值的两个批号自制参考物质重复标记5次,共进行5批实验,计算检测结果的总均值,根据自制参考物质的定值结果计算正确度验证区间,并将检测结果的偏倚与基于BV数据计算的允许偏倚质量规范指标进行比较。③自制参考物质在室内质量控制中的应用:参考WS/T 641-2018文件,使用1个批号自制参考物质和1个批号进口质控品,在一个实验批内,每份标本重复上机检测3次,每周开机检测2次,持续2个月,比较两者的室内质控应用效果。（2）CD34+细胞计数的检测现状及参考物质的初步评价:①检测现状调查:以参加CD34+细胞计数全国室间质评的101家实验室为调查对象,通过问卷调查和参考物质检测,收集相关检测方法学信息及参考物质检测结果。参考国内外指南文件确定CD34+细胞计数的质量控制要求,对调查实验室的遵循情况进行分析,以提出具体改进意见或建议;②参考物质均匀性评价和长期稳定性监测:参考ISO Guide 35和JJF1343-2012对参考物质均匀性进行评价,并对参考物质的长期稳定性进行监测,第0～12周内,每周检测一次,12周后每两周检测一次,以评价参考物质的稳定期限。结果（1）淋巴细胞亚群计数自制参考物质的评价与应用研究:①自制参考物质的评价:Lym202001和Lym202002各检测参数均匀性良好,且在2～8℃贮存条件下可稳定27周（6个月）。Lym202001 批号的 CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD19+和 CD3-CD16/56+的百分计数（%）定值结果分别为:62.8±3.4、15.4±1.4、41.7±3.7、19.1±2.3 和 17.9±3.0,绝对计数（个/μL）定值结果分别为:649±92、158±19、428±45、199±41 和 186±46;Lym202002批号的 CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD19+和 CD3-CD16/56+的百分计数（%）定值结果分别为:76.6±3.8、38.2±1.9、33.3±2.9、6.6±1.0 和 13.8±2.3,绝对计数（个/μL）定值结果分别为:892±130、439±78、387±55、75±19和157±43。②性能验证结果:批内精密度和日间精密度检测结果的CV均小于厂家说明书或基于BV的适宜或最低水平的不精密度质量规范;线性范围验证各检测参数线性回归方程的R2均大于0.995,各参数线性误差和检测不精密度均在允许范围内,表明各亚群检测结果在所验证范围内呈线性;正确度验证各检测参数的均值均在验证区间内,且偏倚在基于BV的适宜水平的允许偏倚范围内。③室内质量控制应用结果:自制参考物质各参数检测结果的CV与进口质控品变异水平接近,且均在基于BV的不精密度允许范围内。（2）CD34+细胞计数的检测现状及参考物质的初步评价:①检测现状调查:共收到97家实验室回报的调查问卷信息,99家实验室回报的参考物质检测结果。问卷调查数据显示实验室对设门方案、移液方式和获取细胞数等关键质量控制要求的遵循率较高,分别为92.8%、83.9%和82.5%;而对采用全血质控品开展室内质量控制、溶血素的选择、样品是否洗涤、是否报告绝对计数以及仪器的质量控制等质量控制要求的遵循率较低,分别为5.2%、28.9%、39.2%、46.4%和55.7%。参考物质检测结果显示,国内实验室百分计数的CV与CAP质评数据相近,但绝对计数CV要大于CAP数据。②参考物质均匀性评价和长期稳定性监测:本次调查所发放的参考物质均匀性符合要求,长期稳定性监测结果显示该参考物质在2～8℃贮存条件下可稳定20周。结论（1）本研究中的淋巴细胞亚群计数自制参考物质具有良好的均匀性和长达6个月的稳定期,联合多家临床实验室对其百分计数和绝对计数同时进行定值后,可用于淋巴细胞亚群计数的性能验证和室内质量控制。（2）临床实验室对部分CD34+细胞计数质量控制要求的遵从性较差,绝对计数结果的实验室间差异较大,建议实验室加强CD34+细胞计数质量控制相关培训,特别是绝对计数方法和技术要求的培训。CD34+细胞计数参考物质具有良好的均匀性和较长的稳定期,能够满足室内质量控制和室间质量评价对参考物质的要求。