【摘 要】
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该实验室利用一株营养缺陷型菌株MFP7(h,adel-D25,ade6-M210,S65T-GFP∷caml,leu1-32,ura4-D18),通过观察细胞内GFP-CaM的荧光强度以分析胞内CaM的浓度及分布变化.该文发现增
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该实验室利用一株营养缺陷型菌株MFP7(h<->,adel-D25,ade6-M210,S65T-GFP∷caml<+>,leu1-32,ura4-D18),通过观察细胞内GFP-CaM的荧光强度以分析胞内CaM的浓度及分布变化.该文发现增加胞外钙浓度以及低浓度(20~100 μmol/L)三氟拉嗪(TFP)不但能促进野生型S.pombe细胞的增殖,而且对MFP7菌株也有同样的效应,这说明胞外Ca<2+>和低浓度TFP对不同遗传型裂殖酵母细胞的增殖均有促进作用.我们首次采用激光扫描共聚焦显微镜观察的方法,以Fluo-3负载S.pombe细胞,荧光强度反映胞质游离Ca<2+>浓度.该文还对用1、5、10mmol/L外Ca<2+>,5mmol/L EGTA,100 μmol/L TFP及缺氮同步化处理的MFP7细胞内GFP-CaM的荧光强度的变化进行了观测.缺氮培养可以将粟酒裂殖酵母细胞生长同步化在细胞周期的G<,1>期,G<,1>期的细胞为单倍体(DNA含量为1C),细胞流式法对细胞DNA相对含量的测定结果表明在48Channel处,而对数期细胞DNA荧光强度的相对值分别在48channel和92channel处,细胞流式法测定发现同步化于G1期的细胞中GFP-CaM的表达量明显高于正常生长的对数期细胞.EGTA处理和同步化实验的结果表明,胞内CaM的表达在G1晚期开始上升到较高的水平.在激光扫描共聚焦显微镜下观察不同周期时相裂殖酵母细胞中CaM的浓度及分布变化,结果表明,分裂期细胞总体荧光强度强于间期细胞;而对同一细胞内荧光强度的分析说明,间期细胞的荧光主要分布于胞质中,细胞核内则分布较少;而正在进行有丝分裂的细胞内荧光主要集中于赤道板处;刚完成有丝分裂的细胞内荧光则相对集中于两端或其中的一端.这个结果表明CaM集中在新的生长点处,与细胞的分裂与伸长密切相关,这与顶端生长的丝状真菌相似.
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