目的:褪黑素可发挥抗肿瘤作用及增强肿瘤免疫功能。本研究以TNF-α为靶点,运用Western blot、ELISA、Real Time PCR、siRNA转染、CCK-8检测等技术方法探究褪黑素对胃癌细胞TNF-α信号通路的影响。进一步丰富褪黑素抗胃癌机制的理论依据,阐明褪黑素对胃癌的抑制作用及可能的免疫调节机制,为胃癌的预防与治疗寻找新的突破口。方法:1.构建小鼠荷胃癌移植瘤模型。雄性615小鼠随机分为4组（8只/组）,小鼠胃癌细胞MFC计数后（5×105个细胞/0.1ml/只）植入小鼠右腋皮下。荷瘤成功后,各组小鼠腹腔注射不同剂量褪黑素干预一周并取材。小鼠肿块HE染色鉴定;Western blot、Real Time PCR法检测小鼠肿瘤组织TNF-α,TNFR1,TRAF2,IKK（α+β）表达变化。2.分别构建不同浓度褪黑素干预MFC和AGS胃癌细胞模型,ELISA法检测相应培养上清TNF-α,TNFR1表达;Western blot、Real Time PCR法检测干预24、48、72小时后胃癌细胞TNF-α、TNFR1、TRAF2、IKK（α+β）表达变化。3.MFC细胞转染TNFR1-siRNA后,分别给予1.0和2.0m M剂量褪黑素干预,CCK-8法检测各组干预24、48、72小时后的增殖活性。结果:1.荷胃癌小鼠肿块HE染色显示细胞具有明显异型性,核质比近1:1,核分裂像明显,符合肿瘤细胞特征。Western blot检测肿瘤组织发现,总体水平上TNF-α和TRAF2蛋白表达下调,TNFR1蛋白上调。与0mg/kg组相比,25、50mg/kg MLT组TNF-α、TNFR1、TRAF2、IKK（α+β）蛋白表达变化一致,仅100mg/kg组IKK（α+β）蛋白出现下调的相反变化。Real Time q PCR检测发现各组中四个因子m RNA表达均有不同程度的上调,差异有统计学意义（P<0.05）。2.不同浓度MLT干预MFC、AGS胃癌细胞后,ELISA检测上清发现TNF-α、TNFR1表达量与时间、剂量有关,未发现其依赖性关系。3.Western blot检测细胞发现,MLT干预MFC 24h后0.5m M组TNF-α蛋白表达上调、IKK（α+β）蛋白下调,2.0m M组TRAF2、IKK（α+β）蛋白表达均下调;48h后0.5m M组TNF-α蛋白表达下调,2.0m M组TRAF2、IKK（α+β）蛋白上调,2.5m M组TRAF2蛋白表达下调;72h后1.5m M组IKK（α+β）蛋白表达下调,2.0、2.5m M组TNF-α、IKK（α+β）蛋白下调且2.5m M组TRAF2蛋白表达下调。而MLT干预AGS 24h后,2.0、2.5m M组TRAF2、IKK（α+β）蛋白均下调;48h后1.5、2.5m M组TRAF2蛋白表达下调;72h后0.5m M组TNFR1蛋白表达上调,1.0m M组TNFR1、IKK（α+β）蛋白表达上调,2.5m M组TRAF2蛋白表达下调。以上变化较总体趋势不一致。Real Time q PCR检测发现各组中四个因子m RNA表达均有不同程度的上调或下调。4.MFC细胞转染TNFR1 siRNA后验证发现,与阴性对照组相比,siRNA TNFR1-2表达下调最显著。24、48和72h后,1.0、2.0m M MLT干预组细胞增殖活性较阴性对照组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）;转染组或转染+褪黑素组较相应对照组增殖活性无显著性差异（P>0.05）。结论:褪黑素可能通过调节TNF-α信号通路中的TNF-α、TNFR、TRAF2、IKK（α+β）因子参与抑制胃癌细胞增殖,发挥抗肿瘤和肿瘤免疫功能。