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猪繁殖与呼吸障碍综合征(Porcine Reproductive and Respiration Syndrome,PRRS)是目前引起猪场繁殖障碍的主要疫病之一,PRRSV基因组中一共有6种结构蛋白基因,分别由ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7基因编码病毒的GP2、GP3、GP4、GP5、M蛋白和N蛋白,其中N蛋白为本病毒的优势结构蛋白,而且该蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,为诊断PRRS的首选蛋白。本研究利用原核表达系统对PRRSV N蛋白基因进行了高效可溶性表达,并用重组的N蛋白作为抗原,成功地建立了检测PRRSV血清抗体的N蛋白间接ELISA方法和抗组氨酸标签单克隆抗体的细胞株。利用基因工程方法将N蛋白基因亚克隆到原核表达载体PET32a中构建的重组表达质粒PET32a-N,进行扩增培养,在IPTG的诱导下成功表达,获得了大小约为33KD的融合蛋白N-His,与预期结果相符;表达量约占细菌总蛋白量的29%。应用镍琼脂糖凝胶树脂层析柱纯化重组N-His融合蛋白,纯化的融合蛋白经SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定,目的蛋白纯度高达91%,并具有良好的免疫原活性。同时利用重组N-His融合蛋白作为包被杭原,通过优化各步反应条件,建立了可从猪血清中检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的重组N蛋白间接ELISA方法。并将所建立的N-ELISA方法与国外进口的PRRS检测试剂盒IDEXX-ELISA对163份临床送检血清进行平行检测,二者阳性阳性符合率为83.9%,阴性符合率为84.2%,总符合率达到84%,表明所建立的N-ELISA具有较好的特异性和敏感性。将融合表达产物N-His按120μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化,经皮下免疫BALB/ c小鼠3次后,取脾细胞与SP2/ 0骨髓瘤细胞进行融合,以融合蛋白N-His为包被抗原,通过建立间接ELISA方法对融合细胞的上清液进行初步检测,再用PRRSV全病毒包被建立的ELISA方法进行二次检测,筛选阳性克隆,经三次亚克隆后得到了2株能稳定分泌抗组氨酸标签的阳性细胞克隆株(3B6和4C10)。间接ELISA检测杂交瘤上清效价为1:100～1:400,而腹水效价为1:400～1:1600;与伪狂犬病毒((PRV)、猪瘟病毒(HCV)、猪细小病毒(PPV)均无交叉反应;2株单抗杂交瘤细胞连续多次传代,分泌McAb的效价基本一致。