论文部分内容阅读
目的
强直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis，AS)是常见的炎症性系统性风湿病，其发病率及致残率均较高，但病因及发病机制至今尚未完全明确。整合素是一类普遍存在于细胞中的跨膜糖蛋白，参与细胞间及细胞与胞外基质(Extracellularmatrix，ECM)间的黏附及细胞信号的转导，介导了包括炎症性疾病在内的多种疾病的发生与发展。踝蛋白(Talin，TLN)及整合素连接激酶(Integrin-linkedkinase，ILK)是整合素信号通路中两个重要的调节蛋白，它们在整合素信号通路的活化过程中发挥了至关重要的调节作用。目前已有个别研究初步提示整合素信号通路可能涉及AS的发病及炎症调节，但尚未见有关TLN及ILK与AS关系研究发表。本研究拟通过流式细胞术(Flow cytometry，FCM)检测AS患者单核及T淋巴细胞中TLN及ILK的表达情况，并以逆转录-聚合酶链反应(Reversetranscription-polymerase chain reaction，RT-PCR)方法检测AS患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中TLN及ILK mRNA的表达情况，同时以健康对照者(Healthy control，HC)及类风湿关节炎(Rheumatoidarthritis，RA)患者为对照，初步探讨TLN及ILK在AS发病及炎症活动中的可能作用及其临床意义，为AS的发病机制及治疗研究提供理论依据。
方法
1.分别入组年龄及性别相互匹配的活动期AS患者、HC及活动期RA患者各30例，详细记录其一般资料及相关临床资料。每例个体均以EDTA抗凝管于空腹状态抽取外周静脉血共6ml以行FCM及RT-PCR检测；对于AS及RA患者，尚同时抽血行血沉及CRP检查。
2.依次以不同免疫荧光标记的抗CD14、CD3、TLN及ILK特异性单克隆抗体对外周血标本进行染色，并以流式细胞仪进行检测，分别比较3组样本间CD14+单核细胞及CD3+T淋巴细胞中TLN及ILK平均荧光强度(Mean fluorescenceintensity，MFI)的差异；并将AS患者单核及T淋巴细胞中TLN及ILK的表达水平与常用的AS疾病活动性及功能性指标进行相关分析。
3.分离PBMCs并提取其总RNA，以RT-PCR方法分别测定各组个体PBMCs中TLN及ILK mRNA的表达并比较其组间差异。
4.组间均数差异显著性检验采用单因素方差分析(One-way ANOVA)及Student-Newman-Keuls(SNK)检验。变量间的相关性评价采用Pearson线性相关分析。所有统计分析均采用SPSS13.0软件进行。
结果
1.FCM检测结果：AS组CD14+单核细胞中TLN及ILK MFI分别为37.71±11.65和53.59±18.64，均高于HC组(28.33±10.1，41.78±13.25)及RA组(26.25±9.87，40.32±18.84)(P＜0.05)，而HC组及RA组间差异无统计学意义(P＞0.05)；AS组CD3+T淋巴细胞中TLN及ILK MFI分别为16.57±4.37和19.04±5.99，也均高于HC组(9.75±3.21，15.59±6.2)及RA组(9.37±3.29，14.89±5.41)(P＜0.05)，而HC组及RA组间差异无统计学意义(P＞0.05)。
2.相关分析结果提示，AS患者CD14+单核细胞TLN MFI与CRP、BASDAI、BASFI及ASDAS-B均存在正相关；ILK MFI与ESR、BASDAI、ASDAS-A、ASDAS-C及ASDAS-D也存在正相关(P＜0.05)。而AS患者CD3+T细胞与各临床疾病活动性及功能性指标均不存在相关(P＞0.05)。
3.RT-PCR检测结果：AS、HC及RA组PBMCs中TLN mRNA的相对定量值分别为1.37±0.22、0.26±0.05及0.27±0.06，ILK mRNA的相对定量值则分别为1.82±0.30、0.23±0.04及0.26±0.04，AS组PBMCs中TLN及ILKmRNA的表达水平均高于HC及RA组(P＜0.05)，而HC与RA组间差异则无统计学意义(P＞0.05)。
结论
1.AS患者单核与T淋巴细胞中TLN及ILK的表达水平均高于HC及RA患者，且其PBMCs中TLN及ILK mRNA的表达水平也高于HC及RA患者，提示TLN及ILK可能参与了AS炎症的发生与发展，AS与RA的发病机制可能存在差异。
2.AS患者单核细胞TLN及ILK的表达水平与其疾病活动性指标BASDAI、ASDAS及ESR或CRP间存在正相关，说明TLN及ILK可作为AS潜在的疾病活动性指标。