【摘 要】
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在本实验中,来自酿酒酵母HS1185的胞外β—1,3—葡聚糖基因被插入TA克隆载体pMD-18中,并被转入大肠杆菌JM109中。重组质粒命名为pMDT-18-GLU。通过Xho I和Nco I双酶切质粒pMDT-18-GLU获得的β—1,3—葡聚糖基因片段插入pET22b（+）的Xho I和Nco I酶切位点。此重组质粒命名为pET22b/GLU。质粒pET22b-GLU被转入大肠杆菌BL21（D
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在本实验中,来自酿酒酵母HS1185的胞外β—1,3—葡聚糖基因被插入TA克隆载体pMD-18中,并被转入大肠杆菌JM109中。重组质粒命名为pMDT-18-GLU。通过Xho I和Nco I双酶切质粒pMDT-18-GLU获得的β—1,3—葡聚糖基因片段插入pET22b（+）的Xho I和Nco I酶切位点。此重组质粒命名为pET22b/GLU。质粒pET22b-GLU被转入大肠杆菌BL21（DE3）,通过菌落PCR筛选出阳性克隆。提取出来已经插入β—1,3—葡聚糖基因的pET22b-GLU质粒和pET22b（+）通过PCR扩增和限制性内切酶验证分析。PCR质粒pET22b-GLU扩增出1337 bp的条带,与酿酒酵母中β—1,3—葡聚糖基因大小一致。在酶切验证中,重组质粒pET22b/GLU被Xho I和Nco I双酶切,得到了5431 bp和1337 bp的两条带,分别为pET22b（+）和β—1,3—葡聚糖基因。最后通过测序来进一步验证正确的基因序列被插入质粒中。测序结果显示,插入的基因序列与与酿酒酵母中β—1,3—葡聚糖基因序列有98%的序列同源性。培养携带pET22b-GLU质粒的重组大肠杆菌BL21（DE3）,并通过IPTG诱导蛋白质表达。通过DNS测定残糖结果显示并没有酶活。但是酿酒酵母中β—1,3—葡聚糖基因已经成功插入pET22b（+）质粒,并转入大肠杆菌BL21（DE3）中。
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