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背景和目的慢性心力衰竭(CHF)是各种心脏疾病的终末阶段，以心室重构和神经内分泌过度激活为基本特征的临床综合征。随着社会进入老龄化，心血管疾病发病率的增高，CHF的发病率正逐年上升。下丘脑室旁核（PVN）作为内脏活动和神经内分泌调节的重要核团，是调控交感神经传出活动最重要的中枢位点和整合部位。研究证实心衰时PVN内神经化学因素如活性氧簇（reactive oxygen species, ROS）、炎性细胞因子（proinflammatory cytokines, PIC）等的改变，可能是促发心衰时交感神经传出增加的重要因素。核因子-κB (NF-κB)广泛分布于全身细胞和组织，在免疫应答和炎症反应等过程中参与众多因子的基因转录调控过程。近年来研究发现，NF-κB在心衰大鼠重要的心血管调节中枢PVN内表达明显增多，NF-κB通过一系列信号转导途径介导CHF时循环细胞因子的中枢作用，诱导炎性反应和细胞凋亡，参与心力衰竭的发病机制。慢性心衰时循环中高水平的醛固酮亦可通过中枢效应影响心室重建，其主要通过心肌的醛固酮受体介导心肌肥厚和心肌重构，其增加是心衰发生的独立的危险因素。本研究采用冠脉左前降支结扎术致急性心肌梗死制备大鼠CHF模型，饮水中分别给予NF-κB拮抗剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）及选择性盐皮质激素受体拮抗剂依普利酮（EPL）干预处理后，观察血浆醛固酮水平与PVN内NF-κB蛋白表达的变化对心衰进程的影响，探讨其相互作用及其对心肌细胞凋亡的调控，为心衰的中枢研究及治疗探索新的思路。材料与方法1．模型制备成年健康雄性SD大鼠70只，体重250～300g，由山东中医药大学实验动物中心提供。随机分为:慢性心衰组（CHF组）和假手术组(SHAM组)。CHF组行冠脉左前降支结扎术致急性心肌梗死，制备大鼠CHF模型；假手术组只穿线不结扎。CHF组再随机分为未治疗组（CHF组，n=20）、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐干预组（PDTC组，n=20）和盐皮质激素受体拮抗剂依普利酮干预组（EPL组，n=20)，假手术组(SHAM组，n=10)作为正常对照。治疗组大鼠饮水中分别给予PDTC（150mg/kg/d），或EPL（30mg/kg/d），治疗持续6周。2．心衰程度的判断6周后，测定左心室湿重／体重比（LVW/BW(mg/g)），右心室湿重／体重比（RVW/BW(mg/g)）和肺湿重／体重比(LW/BW(mg/g))评价心功能及心衰程度。3．放射免疫法检测血浆醛固酮水平大鼠颈动脉血注入冰水预冷的EDTA抗凝管中，混匀后离心（4℃，3000rpm，10min），取上清置于Tube管中，采用放射免疫法测定血浆醛固酮水平。4．TUNEL法观察心肌细胞凋亡制备心肌组织石蜡标本，心肌细胞凋亡采用TUNEL法检测。细胞核呈棕褐色或者呈棕黄色者为凋亡阳性细胞，光镜下判定其分布情况，每张切片拍摄5个阳性视野。心肌细胞凋亡率是凋亡阳性细胞数占观察心肌细胞数的比例，心肌细胞凋亡指数(AI)(％)=(心肌细胞凋亡细胞核数/正常心肌细胞核数)×100％。应用SPSSl3.0统计学软件分析。5．Westem blot法检测下丘脑室旁核内NF-κB蛋白表达提取下丘脑室旁核蛋白后，采用Western blot检测下丘脑室旁核内NF-κB蛋白水平。蛋白采用聚丙烯酰胺变性凝胶方法分离，蛋白经电转膜法转移到硝酸纤维膜上，脱脂奶粉封闭2h，分别加入小鼠抗兔NF-κBp65(1:200)，4℃孵育过夜，辣根酶标记山羊抗兔IgG（1:2000），37℃孵育2h，化学发光试剂显影，显影胶片应用UVP凝胶图像扫描系统扫描吸光度，实验组吸光度值与对照组吸光度值比值即为结果。蛋白表达水平以其与β-actin光密度比值来表示。应用SPSS13.0统计学软件分析。结果1．CHF组大鼠左心室湿重／体重比（LVW/BW(mg/g)），右心室湿重／体重比（RVW/BW(mg/g)）和肺湿重／体重比(LW/BW(mg/g))均明显高于SHAM组，组间差异有统计学意义(P<0.05)。饮水中给予PTDC或EPL治疗后各项心功能指标均降低，且EPL组低于PTDC组，组间差异有统计学意义(P<0.05)，该实验大鼠心力衰竭模型成功建立。2．光镜下凋亡阳性细胞为细胞核呈黄褐色。与SHAM组（9.68±8.40%）比较，CHF组（36.82±6.34%）心肌凋亡阳性细胞数明显增高，组间差异有极显著性(P<0.01)。与CHF组比较，EPL组（24.21±6.44%）可明显降低心肌细胞凋亡，组间差异有极显著性(P<0.01)，而PDTC组（34.24±5.92%）亦有降低作用，组间差异有显著性(P<0.05)；EPL组与PDTC组间差异有极显著性(P<0.01)，提示EPL抑制心肌细胞凋亡作用远大于PDTC组，EPL在抑制心肌细胞凋亡、改善心衰症状方面，疗效大于PDTC。3．CHF组(0.30±0.07)血浆醛固酮水平显著高于SHAM组(0.14±0.07)(P<0.01)；与CHF组(0.30±0.07)比较，EPL组(0.20±0.12)可显著降低血浆醛固酮水平(P<0.01)，PTDC组(0.28±0.12)无明显降低醛固酮的作用（P>0.05）。EPL组与PTDC组比较，两组间差异有极显著性(P<0.01)，而与SHAM组比较，差异无统计学意义（P>0.05）4． Westem blot结果示EPL组(0.54±0.14)、 PDTC组(0.70±0.11)、 CHF组(0.83±0.31)PVN内NF-κB蛋白表达较SHAM组(0.27±0.10)依次升高。各组PVN内NF-κB表达与SHAM组相比，差异均有极显著性（P <0.01）；CHF组与EPL组比较，组间差异有极显著性（P <0.01），与PDTC组比较，组间差异有显著性（P<0.05）；EPL组与PDTC组组间差异有显著性（P<0.05）。结论1．CHF组大鼠血浆醛固酮水平明显高于SHAM组。2．CHF组大鼠PVN内NF-κB表达明显增多，其水平与心衰的严重程度密切相关。NF-κB可能在心力衰竭的进程中发挥了重要作用，抑制其活性有可能成为治疗心衰的一个新靶点。3．慢性心衰大鼠血浆醛固酮水平与PVN内NF-κB的表达有相关性，心衰时循环中高浓度的血浆醛固酮可激活PVN内的NF-κB，且PVN内活化的NF-κB可介导心衰过程中心肌细胞凋亡，影响心衰的发生、发展。外周途径抑制血浆醛固酮或中枢NF-κB水平，均可延缓心力衰竭的发生发展。