水稻YEATS结构域包含基因OsYAF9的克隆及材料创制

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抽穗期作为重要的农艺性状,是水稻适应季节、气温变化,保证产量的关键。水稻抽穗期同时受遗传和环境的影响。目前,拟南芥作为长日照模式植物,对其开花时间的调控机制研究已经非常深入。但是,水稻作为短日照模式植物,深入的抽穗期分子调控机制还有待进一步发掘。已有研究表明,YEATS结构域在进化上保守,在超过100个不同的真核蛋白中被发现,参与转录与染色质修饰。在酵母中,Yaf9,Taf14和Sas5组成YEATS结构域蛋白家族,其中Yaf9是组蛋白H4乙酰转移酶复合体NuA4和染色质重塑复合体SWR1的共同亚基,介导NuA4和SWR1复合物的聚合和分离,从而影响其功能。YEATS结构域是Yaf9行使功能所必须的,酵母菌缺失Yaf9时,对DNA损伤、冷害等较敏感。酵母Yaf9蛋白在拟南芥中有两个同源物YAF9a和YAF9b(TAF14),其功能结构域YEATS在酵母,水稻,苜蓿,人和果蝇中的序列保守。研究发现,YAF9a和YAF9b功能冗余,双重突变体表现出包括早花在内的多种表型缺陷。其中YAF9a通过影响FLC组蛋白H4乙酰化水平控制开花时间。但是,水稻中YEATS结构域包含基因的功能至今未见报道。为了研究水稻中YEATS结构域包含基因的功能,本课题利用反向遗传学的方法,通过生物信息学手段,在NCBI数据库中查找获得YEATS结构域包含基因在水稻中有一个拷贝的同源基因OsYAF9,进化分析及功能结构域保守性分析表明,该基因的功能结构域在不同物种中进化保守。同时,借助CRISPR-Cas9基因编辑技术、DNA重组技术,构建了OsYAF9基因的超表达及基因敲除表达载体,并利用水稻遗传转化技术,转化水稻品种SN9816,获得了T1代转基因植株;将35S启动子启动CDs并融合GFP的表达载体瞬时转化水稻原生质体,对其进行亚细胞定位分析,结果表明,OsYAF9基因编码的蛋白质定位在细胞核中;又利用荧光定量PCR法对OsYAF9在水稻不同组织器官中的表达特性进行了检测,结果显示,OsYAF9基因呈组成型表达,在根、茎、叶、叶鞘、茎尖生长点以及幼穗1-3cm、5-7cm、7-13cm、受精后4天、受精后7天中均有表达。综上所述,我们利用生物信息学手段分析了水稻OsYAF9基因的进化及结构域保守性,并创制了研究基因功能所必须的基因敲除和超表达材料,为深入研究OsYAF9基因功能奠定了基础。
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