NOS在缺氧胎鼠组织中的表达及当归保护机制的实验研究

来源 :泸州医学院 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangyp88
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目的:探讨一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase, NOS)在宫内缺氧状态下胎鼠骨髓、软骨、神经组织中的表达,以及中药当归注射液(Angelica injection)对宫内缺氧组织的保护作用,为临床宫内缺氧的治疗和愈后评价提供理论依据和实验数据,并为生育控制和妊娠疾病的研究、诊断及治疗提供新的思路和手段。方法:(1)动物分组及饲养:将6只雌性Wistar大鼠分别与雄鼠合笼饲养,于次晨发现阴栓者记为怀孕0天,记下日期,单独饲养雌鼠至19天孕期。将6只孕鼠随机分为对照组、缺氧组和当归组,每组2只。(2)缺氧动物模型建立:将对照组孕鼠经尾静脉缓慢注射0.9%生理盐水(8ml/kg体重)1小时后脱颈处死,快速剖腹取出胎鼠(每只孕鼠产胎鼠5~8只),剔除子宫壁、羊膜等后,中性福尔马林固定;将缺氧组孕鼠经尾静脉缓慢注射0.9%生理盐水(8ml/kg体重),建立缺氧模型致胎鼠宫内缺氧1小时后复氧1小时,再用与对照组相同的方法取材固定;当归组孕鼠用25%的当归注射液(8ml/kg体重)代替生理盐水,其余与缺氧组相同。(3)石蜡切片和免疫组化实验:每小组选10个胎鼠整胎作石蜡横切片,每个标本选取相邻4张切片间隔作HE染色及神经型一氧化氮合酶(nNOS)免疫组化反应。(4)图像分析和统计分析:选取三组中均含有骨髓、神经组织、软骨组织切片各3张,每张切片用GD—8病理彩色图像分析系统,在400倍下进行图像分析,每张切片5个视野,由计算机处理系统测定各组免疫反应阳性细胞的光密度,数据用SAS软件统计分析,结果以X±S表示。结果:1、免疫组化染色:(1)对照组:少数骨髓中有核红细胞、神经组织中神经细胞胞质染浅棕色,软骨组织中软骨囊染浅棕色;(2)缺氧组:骨髓中有核红细胞、软骨组织中软骨细胞胞质、软骨囊均染成棕色,神经组织中神经细胞胞质染成深棕色;(3)当归组:三种细胞胞质均染成棕色。2、免疫组化染色图像分析:三种组织中缺氧组nNOS含量均较对照组、治疗组明显增加(P<0.05),治疗组nNOS含量比缺氧组明显减少(P<0.05)。结论:(1)通过孕鼠缺氧成功建立宫内胎鼠缺氧模型;(2)对照组骨髓、神经组织中少量有核红细胞、神经细胞胞质、软骨囊有nNOS活性,提示nNOS激活产生适量NO对胚胎发育起着生理调节作用;(3)孕鼠缺氧1小时引起宫内胎鼠骨髓、软骨、神经组织中nNOS活性增强,提示nNOS广泛存在于机体各组织,其过量表达可能是宫内缺氧时引起胚胎多种组织细胞,特别是神经组织损伤的重要机制之一。(4)应用中药当归注射液后,骨髓、神经组织、软骨组织中阳性细胞的nNOS的活性显著减弱,提示当归注射液对宫内缺氧胎鼠有保护作用。
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