双歧杆菌对过敏性哮喘儿童DC成熟及其分泌细胞因子的影响

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目的(1)研究青春型双歧杆菌对过敏性哮喘儿童外周血单个核细胞(PBMC)来源的村突状细胞(DC)表达CD86和HLA-DR的影响;(2)探讨青春型双歧杆菌对过敏性哮喘儿童PBMC来源的DC分泌IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12、IL-23和IFN-γ的影响。方法从15名过敏性哮喘儿童和15名非哮喘儿童的外周血单个核细胞诱导生成未成熟DC,分别加入青春型双歧杆菌或脂多糖(LPS)后继续培养DC 2天,(1)每天于倒置显微镜下观察DC形态;(2)用流式细胞仪检测各组DC表面CD86和HLA-DR的分子表达;(3)用ELISA方法检测培养上清中IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12、IL-23和IFN-γ的水平。结果1、DC经双歧杆菌和LPS分组处理后第2天,于倒置显微镜下观察到双歧杆菌组和LPS组的DC突起均较空白组明显,具有突起的细胞数量较空白组增多,而双歧杆菌组与LPS组比较,LPS组有突起的细胞数量明显增多,提示DC过度生长。2、哮喘儿童DC表面CD86表达水平低于非哮喘儿童(31.73±23.15vs62.20±30.47,P<0.05),双歧杆菌刺激后,与空白处理比较,哮喘儿童DC表面CD86表达明显增高(70.85±29.87vs31.73±23.15,P<0.05),HLA-DR表达无明显变化(62.97±28.95vs59.90±32.52,P>0.05),非哮喘儿童CD86HLA-DR表达均无明显变化;与空白处理比较,LPS刺激可明显增加哮喘儿童和非哮喘儿童CD86和HLA-DR的表达(哮喘儿童CD86:94.43±4.44 vs 31.73±23.15,P<0.05;非哮喘儿童CD86:92.03±9.13 vs62.20±30.47,P<0.05;哮喘儿童HLA-DR:90.39±11.70 vs59.90±32.52,P<0.05;非哮喘儿童HLA-DR:82.18±14.14 vs60.78±23.38,P<0.05)。3、与空白处理比较,双歧杆菌能明显刺激哮喘儿童DC分泌IL-12、IFN-γ、IL-1β及IL-6增高(IL-12:509.15±780.07 vs 13.88±6.97,P<0.05;IFN-γ:22.70±30.65 vs0.41±0.44,P<0.05;IL-1β:96.57±159.85 vs 3.51±1.00,P<0.05;IL-6:534.91±327.81vs 252.20±265.79,P<0.05),刺激非哮喘儿童DC分泌IL-12、IL-10、IL-1β及IL-23水平增高(IL-12:270.75±224.44 vs 16.88±8.49,P<0.05;IL-10:259.11±176.13 vs132.14±126.99,P<0.05;IL-1β:45.22±35.49 vs 10.27±21.37,P<0.05;IL-23:110.66±83.75 vs 46.37±13.58,P<0.05)结论1、过敏性哮喘儿童DC表面CD86的表达可能存在异常,双歧杆菌能适度上调其表达,在DC的成熟过程中可能起调节作用。2、双歧杆菌能够刺激过敏性哮喘儿童DC分泌IL-12和IFN-γ,从而改变Th2优势分化,纠正Th1/Th2失衡。3、双歧杆菌可能通过刺激哮喘儿童DC分泌IL-1β及IL-6增高,达到促进Th17细胞分化的作用。
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