目的 骨髓基质细胞(BMSCs)移植治疗脊髓损伤的实验研究进年来国内外均有报告,取得了较好的实验结果,证实BMSCs可在脊髓损伤区周围存活并分化。但其促进脊髓损伤修复的作用机制尚不够清楚。本实验分别应用免疫组织化学技术,观察BMSCs移植后的存活、迁移、整合,对大鼠脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经丝蛋白(NF)的表达的影响;应用RT-PER的方法,观察BMSCs移植对大鼠脊髓损伤后的胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、髓鞘蛋白脂蛋白(PLP)表达的影响;并进行后肢运动功能评分。拟从新的角度观察BMSCs移植对脊髓损伤修复的作用,并探讨BMSCs促进脊髓损伤修复的作用机制。 材料与方法 1.大鼠BMSCs的培养。 2.免疫细胞化学方法检测BMSCs CD45、CD90的表达。 3.BrdU标记:细胞传3代,移植前72h按20μmol/L终浓度加入BrdU标记,移植时PBS洗涤细胞3次,调终浓度1×10~5/μl备用。 4.动物随机分为移植组和对照组,并按术后不同时相点分成亚组。 5.手术方法:制作胸髓半横断模型。使用微量注射器进行BMSCs移植,对照组依同样方法注射等量PBS液。 6.手术或细胞移植后不同时间点,用免疫组化染色检测BrdU,观察BMSCs的存活、迁移;检测NF、GFAP的表达。细胞内有棕黄色颗粒者为阳性。免疫组化结果用计算机辅助的数字图像分析仪(Metamorph Image System(4.6))进行定量分析。