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孕酮受体（progesterone receptor PR）基因是核受体超家族成员之一，在介导与调节卵巢排卵、胚胎植入、乳腺发育等生殖生理以及相关生殖健康中起着关键的作用。在体条件下，孕酮可以引起孕酮受体表达降低，那么仅在子宫内膜上，这种调节是否存在?因此本实验目的就是探讨体外条件下孕酮对牛子宫内膜细胞PR表达的影响。实验方法为将子宫内膜细胞进行体外培养，然后在无血清培养条件下添加不同浓度的孕酮，处理不同时间，将细胞的RNA进行抽提，以β-actin基因为参照，采用半定量PCR方法研究PR表达水平。其意义在于，对PR进行深入全面的研究，不仅有利于阐明胚胎植入过程中孕酮的作用机制和雌性不孕的分子发病机理，推动基础理论研究的发展，而且在诊断、治疗等应用医学领域也将会具有实用价值。其具体试验方法和结果如下： 1．选择组织块培养方法培养牛子宫内膜基质细胞，培养体系为：DMEM／F12+FBS（原代20％，传代10％）+100 IU／ml青链霉素，在37℃，5％CO2和饱和湿度条件下培养。 2．将来自8头未孕黄牛个体传代培养获得的3～8代子宫内膜细胞混合后，按1中培养条件培养，直到细胞铺满培养瓶底60％后，换无血清培养液处理24小时，再用含有不同浓度孕酮（0、50、100、200和400ng／ml）的无血清培养液培养细胞，在孕酮处理后（1、3、6、12和24h）收集细胞进行总RNA抽提。 3．对总RNA进行定量后作RT-PCR反应，把RNA浓度调到＜1μg/μl，优化目的基因PR和参照基因β-actin的PCR条件，在一般反应环境不变的条件下，分别改变循环次数、退火温度，选出目的基因PR和参照基因β-actin均在直线增加阶段的条件。 4．取PCR产物5μl经1.5％琼脂糖电泳，凝胶成象系统获取电泳图象。用Bio-Rad Quantity one4.5软件对PR与β-actin电泳条带进行分析，以β-actin为参照，对PR的表达量进行分析。 主要结果如下： 1．在组织块贴壁后第5天发现有少量混合细胞（上皮细胞和基质细胞）呈放射状生长于组织周围，形态上基质细胞呈梭形或椭圆形，还有的呈不规则长条形；上皮细胞呈圆形，胞核较大而圆，到第10～14天细胞可以基本长满培养瓶底，并且细胞基