耐盐基因(mtlD)转化旱稻研究

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本研究利用基因枪法,首次将大肠杆菌1-磷酸甘露醇脱氢酶(mtlD)基因转入旱稻。并探索了旱稻的组织培养条件和转化条件。由于水、旱稻两种生态型和基因型的差异,其组织培养及转化条件有一定的区别。对于水稻的研究已经有许多报道,并已趋于成熟。但对于旱稻的研究见报道的并不多。本文对旱稻的组织培养及转化条件作了一些摸索。研究结果表明旱稻与水稻的组织培养条件有一定的相似性,但需作些改进。对幼胚、成熟胚两种材料的愈伤诱导率比较,结果表明幼胚的愈伤诱导率远远高于成熟胚的,但幼胚由于受取材及操作技术的限制,大大影响了它的优越性。成熟胚若大量地培养愈伤,也是很好的转化受体材料。本文还用成熟胚作激素的浓度梯度的试验,研究旱稻的愈伤诱导最佳条件。 基因枪轰击次数对抗性愈伤的筛选频率及分化率都有影响。本试验利用适合于单子叶植物的强启动子—水稻Act1启动子与大肠杆菌1-磷酸甘露醇脱氢酶(mtlD)基因组成的嵌合基因,以潮霉素磷酸转移酶(Hpt)基因为选择标记基因,构建的pMH质粒。以四个北方普栽旱稻品种的幼胚愈伤组织为受体材料,用基因枪轰击法将目的基因导入。用潮霉素进行初步筛选,通过组织培养的方式得到再生植株。三个品种R0代均已结实,其种子进行海南省繁种,予进行R1代的耐盐性鉴定,及其遗传稳定性分析。结果为:1. 确定2.5mg/L 2,4-D或者2mg/L2,4-D+0.5mg/LABA较适宜。2. 对于分化条件,我们认为6-BA对旱稻的分化较好(与KT相比),并且NAA/6-BA的比值在0.2-0.3之间较好。3. 结果表明旱稻愈伤组织连续轰击2次效果较好,连续轰击3次以上,抗性愈伤的筛选频率及分化率都有所下降。4. 愈伤的继代天数对筛选频率也有一定的影响。试验表明,继代14天有利于抗性愈伤的产生。5. 再生植株的分子检测表明,有70%的阳性率。6. 经耐盐性鉴定,阳性植株中有80%左右的植株芽期可耐0.5%的NaCl.
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