【摘 要】
：
目的:帕金森氏病（Parkinson’sdisease,PD）作为第二大神经退行性疾病,现行治疗的主要策略是增加突触间隙多巴胺浓度,或直接激动多巴胺受体,改善和缓解症状。但是长期使用该类药物并不能阻止PD的进展,因此迫切需要找到减少多巴胺神经元凋亡,延缓PD病程继续发展的药物。糖原合成酶激酶3β（Glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β）是一个潜在治疗靶点,在PD模型中
【基金项目】
：
广东省自然科学基金（No.2017A030313884）；
论文部分内容阅读
目的:帕金森氏病（Parkinson’sdisease,PD）作为第二大神经退行性疾病,现行治疗的主要策略是增加突触间隙多巴胺浓度,或直接激动多巴胺受体,改善和缓解症状。但是长期使用该类药物并不能阻止PD的进展,因此迫切需要找到减少多巴胺神经元凋亡,延缓PD病程继续发展的药物。糖原合成酶激酶3β（Glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β）是一个潜在治疗靶点,在PD模型中抑制其活性能够减少细胞凋亡,增加细胞活力。在此研究中我们使用Tideglusib（Tide）,一个特异性GSK-3β抑制剂,探索其在1-甲基-4-苯基吡啶（1-methyl-4-phenylpyridinium iodide,MPP+）和 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP）诱导的 PD 模型中对多巴胺能细胞的作用及其机制。方法:（1）使用MPP+诱导SH-SY5Y细胞凋亡作为PD体外模型,MTT检测细胞活力,Hoechst染色法和流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot检测GSK-3β和tau蛋白磷酸化水平随时间变化和在有无Tide处理时两个蛋白磷酸化水平的变化情况。（2）使用Western blot、PCR和免疫荧光检测抑制GSK-3β之后,对神经源性基因 Notch 同源蛋白 1（Neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch-1）、毛发分裂增强子蛋白1（Hairy and enhancer of split 1,Hes1）和细胞外信号调节激酶（Extracellular Signal-Regulated Kinases,ERK）的转录水平或蛋白表达。（3）使用DAPT抑制γ分泌酶,抑制Notch的剪切,进而抑制Notch-1通路的激活。MTT检测抑制该通路后对于MPP+诱导的SH-SY5Y细胞活力的影响。使用Western blot检测凋亡相关蛋白半胱氨酸肽酶3（apoptosis-related cysteine peptidase,caspase3）剪切体的表达。使用钙黄绿素-碘化丙啶（Calcein/PI）染色观察模型条件下细胞死亡率。（4）siRNA敲低Hes1蛋白表达后使用MTT检测细胞活力,Western blot检测凋亡蛋白caspase 3剪切体的表达,Hoechst/PI检测细胞死亡率进一步探索Notch-1通路在MPP+诱导的PD细胞模型上的作用。（5）过表达Hes1后,使用MTT检测细胞活性、Western blot检测凋亡蛋白探索Notch-1/Hes1通路在Tide药效发挥中的作用。（6）使用ERK蛋白抑制剂SCH772984阻断ERK的磷酸化,Western blot检测ERK的磷酸化变化,MTT检测细胞活力,探索ERK蛋白的激活在Tide药效发挥过程中的作用。（7）在腹腔注射MPTP诱导的PD小鼠模型中,使用免疫荧光、行为学实验检测Tide对于PD小鼠形态学、行为学的作用,Western blot检测凋亡蛋白及验证机制相关蛋白。结果:（1）Tide能对抗MPP+诱导的体外PD细胞模型的毒性作用,增加SH-SY5Y细胞活力,减少MPP+引起的细胞凋亡;抑制GSK-3β的活性,减少磷酸化tau蛋白的产生。（2）Tide减少Notch-1的入核,减少Hes1的转录和蛋白的表达,同时增加ERK的磷酸化水平。（3）使用DAPT和siRNA敲低Hes1的表达以抑制Notch-1通路的激活,结果显示抑制Notch-1通路减少MPP+诱导的PD细胞模型的凋亡。（4）过表达Hes1阻断Tide对MPP+作用下SH-SY5Y细胞的保护作用,增加Tide降低的caspase 3剪切体的表达而减少抗凋亡蛋白Bc12的表达;而ERK抑制剂并不影响Tide药效的发挥。（5）Tide降低PD模型小鼠黑质纹状体中NICD/Hes1的蛋白表达水平。（6）Tide减少PD模型小鼠中凋亡蛋白Bax的表达,增加抗凋亡蛋白Bcl2的表达;增加黑质纹状体中TH的表达,改善MPTP引起的的运动障碍。结论:Tide通过抑制GSK-3β/Notch-1/Hes1通路的激活,减少MPP+/MPTP诱导的PD模型中细胞凋亡。
其他文献
背景炎症是癌症的七大特征之一,近年来越来越多的证据证明炎症免疫水平与鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）患者的预后相关,通过外周血中常见的炎症免疫细胞计算所得的 SII（Systemic immune-inflammation index）和 SIRI（Systemic Inflammation Response Index）已被证实是可靠生物标志物,其具有重要预后价
目的探讨采用肌肉减少症评估口腔鳞状细胞癌（Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC）患者营养状况的临床价值。方法回顾性分析126例2012年1月至2019年9月在南方医科大学南方医院口腔颌面外科进行OSCC根治性手术的原发性OSCC患者的临床资料,通过PACS（Picture Archiving and Communication Systems,PACS）系统下载患者的
子痫前期是妊娠20周之后新发现的高血压疾病,发病机制不明,是以多脏器功能受损为特征的一组临床综合征,在妊娠期发病率高达2-8%。ELABELA（ELA）是一种新型APJ内源性多肽配体,主要分布于人类的胎盘和肾脏。ELA-APJ信号通路参与了胚胎早期心血管系统形成,ELA低表达或敲除ELA基因,可引起胎盘血管新生异常,可产生高血压、蛋白尿等症状,但关于ELA在早孕期外周循环中的表达情况及其对子痫前期
目的1.建立正常全颈椎三维有限元模型和上颈椎失稳模型,并对模型进行有效性验证。2.在失稳模型上加载五种不同内固定方式,前入路两种,后入路三种,随后进行有限元运算分析。3.研究后路枢椎关节突螺钉的临床疗效。方法选取一名志愿者,获得其颈椎CT图像,通过CT数据利用有限元相关软件构建出正常全颈椎三维有限元模型并进行有效性验证,随后在正常模型基础上通过去除横韧带组织建立上颈椎失稳模型并验证其有效性,最后在
光动力治疗（Photodynamic therapy,PDT）是利用光动力反应进行治疗的一种新技术,具有非侵袭性、毒性低、普适性强、适应性好、可反复治疗等优势,成为肿瘤治疗领域的研究热点。本论文主要是设计合成具有D-π-A结构的光敏剂,表征其结构、光学性能,细胞毒性,生物相容性和活性氧产生性能,研究其体内近红外荧光成像和双光子成像性能,检测其细胞器靶向成像性能,考察其体内外光动力治疗肿瘤效果。论文
研究背景嵌合抗原受体T细胞（Chimeric antigen receptor T cells,CAR-T）免疫疗法在治疗血液系统肿瘤中取得了令人兴奋的成果。然而,CAR-T免疫治疗所导致的肿瘤溶解综合征、致命性细胞因子释放综合征、CAR-T相关脑病综合征和脱靶效应等副作用不容忽视。如何进一步提高CAR-T临床应用的可控性和安全性成为目前研究的重中之重。分子开关的设计可能是改善给药后不良反应、抗原
1 研究背景创伤事件可导致创伤后应激障碍（Post-traumatic Stress Disorder,PTSD）的发生。剖宫产对产妇来说是一种创伤事件,它可能会引起产后PTSD。目前,国内关于产后PTSD的研究较少,而国外关于剖宫产与产后PTSD的报道结果不一致。因此,提出假设:剖宫产产妇产后PTSD发生率高,且剖宫产是产后PTSD的危险因素。本研究首先进行文献回顾,开展剖宫产产妇产后PTSD发
代谢组学是一门在20世纪90年代发展起来的技术,可检测机体受外源因素刺激或内在病理生理变化产生的代谢改变。通过代谢组学分析,可以挖掘疾病发生发展过程中的关键小分子代谢物,解析机体的病理生理状态,探究疾病潜在的发病机制。以质谱为核心的技术是代谢组学中常用分析方法,具有高灵敏度、高选择性等优点而广泛用于疾病研究。妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus,GDM）指的是妊
研究背景:脑出血（ICH）是卒中最致命的亚型,目前尚缺乏有效的治疗方法。ICH患者运动功能受损与近端皮质脊髓束（CST）受到血肿直接压迫、和继发性近、远端CST损伤密切相关。其中,神经炎症在ICH后继发性神经损伤的病理生理机制中起着关键作用,神经炎症被触发后,首先被激活的免疫细胞是小胶质细胞,它分泌大量细胞因子,促进炎症进展。小胶质细胞是先天免疫系统的主要组成部分,它们通过激活和形成典型的M1型（
红树植物分布在热带和亚热带海洋潮间带,是一种耐盐的高等木本或灌木植物。以红树植物为主组成的生态群落叫红树林。红树植物因为其独一无二的生长环境,体内产生的次生代谢产物不仅种类多,数量大,而且活性广泛而多样。目前从红树植物中分离提取到的天然产物是发现新药先导化合物的重要来源。本课题对来自泰国的木果楝属红树植物Xylocarpus granatum的种子部分进行了化学成分的分离鉴定。运用TLC、HPLC