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在当前营养保健食品热中,各种营养素及其它营养成分滥加、乱加的现象比较严重。罗格列酮(Rosiglitazone)属噻唑烷二酮类抗糖尿病药,通过提高胰岛素的敏感性而有效地控制血糖。调节胰岛素应答基因的转录,控制血糖的生成、转运和利用,纠正糖及脂质代谢异常,降低空腹及餐后血糖,改善高葡萄糖毒性。由于它的功效作用,近年来被添加到减肥类与降糖类保健食品中。建立药物的免疫分析技术首先要获得特异性的抗体,本文开展了罗格列酮免疫分析技术研究。主要内容研究结果如下:1.罗格列酮本身没有免疫原性,必须将其载体蛋白偶联后,才能诱导小鼠产生抗体。本文研究制备了罗格列酮的半抗原,通过质谱进行了鉴定。2.用活泼酯法将罗格列酮与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原与包被原;经紫外光谱分析,人工抗原罗格列酮半抗原-BSA、罗格列酮半抗原-OVA与载体BSA、OVA及半抗原的紫外光谱图相比均发生明显变化,两种人工抗原最大吸收峰的位置向远紫外区偏移,表明人工抗原合成成功。BCA试剂盒法测得罗格列酮半抗原-BSA浓度为4.668mg/ml,而罗格列酮半抗原-OVA浓度为3.312 mg/ml;并测定出罗格列酮半抗原-BSA、罗格列酮半抗原-OVA两种人工抗原的偶联比分别为14:1、8.2:1。上述所有合成的人工抗原经分装后-20℃保存。3.用免疫抗原(罗格列酮半抗原-BSA)免疫Balb/C小鼠S1,获得罗格列酮鼠多抗血清,其最佳包被抗原浓度为稀释10000倍;最佳抗体稀释度10000倍;理想二抗稀释倍数为1:10000。同时取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合。细胞亚克隆、筛选后得到两株能够稳定分泌抗罗格列酮单克隆抗体的细胞株,分别命名为ED3和CC4。4.本文中同时进行了兔多抗的制备,同时优化了间接竞争ELISA的反应条件,其中罗格列酮半抗原-OVA为最佳包被原;最佳一抗稀释液为Y液,最佳包被抗原稀释倍数为1/20000,最佳抗体稀释度1/20000,最佳二抗稀释度1/10000,最佳一抗竞争时间为50 min,最佳二抗反应时间为45min。5.绘制了罗格列酮标准曲线。建立罗格列酮间接竞争ELISA检测方法,检测限为2.18 ng/mL,检测范围为6.07-200.11 ng/mL。发现在鼠多抗和兔多抗这两者之间,兔多抗的检测限值更低,效价更高。本论文为保健食品中违法药物的快速检测试剂盒开发奠定基础,并为保健食品样品前处理提供依据。在保健食品热的今天,保健食品中违法药物的检测同样会成为食品安全检测的重点。