【摘 要】
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绵羊痒螨（Psoroptes ovis）是寄生于家养和野生动物皮肤表面的主要寄生虫,给养殖业造成巨大的经济损失,表皮角质形成细胞是P.ovis与宿主接触的第一道细胞和主要靶细胞,因此,本研究以角质形成细胞作为体外模型,探究绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子重组蛋白（rPocMIF）功能,以期为理解痒螨病致病机理提供更多依据。1绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子（PocMIF）的原核表达和酶活测定PocMIF基
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绵羊痒螨（Psoroptes ovis）是寄生于家养和野生动物皮肤表面的主要寄生虫,给养殖业造成巨大的经济损失,表皮角质形成细胞是P.ovis与宿主接触的第一道细胞和主要靶细胞,因此,本研究以角质形成细胞作为体外模型,探究绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子重组蛋白（rPocMIF）功能,以期为理解痒螨病致病机理提供更多依据。1绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子（PocMIF）的原核表达和酶活测定PocMIF基因含357 bp的开放阅读框,编码118个氨基酸,预测相对分子质量为13.00 ku;经p ET-32a（+）表达后的重组蛋白（rPocMIF）主要以上清形式存在,镍柱纯化后SDS-PAGE显示约32 ku的单一条带,符合预期大小;纯化后rPocMIF的内毒素含量为0.029 EU/m L,符合要求,且rPocMIF具有互变异构酶活性,活性随浓度增加而增加。2 rPocMIF刺激兔角质形成细胞的转录组学分析RNA-seq技术分析rPocMIF刺激兔原代角质形成细胞不同时相（1、6、12、24 h）。结果显示,蛋白处理组共鉴定出15183个m RNA序列;与阴性对照组比,蛋白处理组刺激1、6、12和24 h共有的显著变化m RNA 711个;GO和pathway通路富集分析揭示与细胞周期、细胞分化和河马通路等占优势;将差异基因富集到25个趋势模型中,其中9种趋势富集显著;PPI分析得出的hub蛋白主要和细胞的增殖、凋亡、分化相关;qPCR结果与转录组的结果趋势一致。综上,rPocMIF具有调节角质形成细胞增殖和凋亡的潜在作用,但有待进一步证实。3 rPocMIF对兔角质形成细胞细胞增殖和凋亡的影响初探rPocMIF刺激兔原代角质形成细胞12、24、36、48、60、72 h,用CCK8试剂盒检测细胞增殖情况,同时用流式细胞术检测蛋白刺激48 h后的细胞凋亡情况。结果显示,与空载蛋白组和阴性组相比,rPocMIF刺激36～72 h角质形成细胞的增殖水平显著（P<0.05）升高,rPocMIF刺激48 h的角质形成细胞总凋亡率和早期凋亡率都显著下降（P<0.05）。上述结果表明,rPocMIF可促进兔角质形成细胞的增殖和抑制其凋亡。
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