肌肉生长抑制素(Myostatin，MSTN)是一种抑制动物骨骼肌生长发育的负调控因子，在肌细胞的形成过程中有着重要的生理功能。本课题通过分子生物学手段获得了猪MSTN全长DNA片段，构建了克隆载体，并在大肠杆菌中融合表达了猪的MSTN蛋白。利用MSTN蛋白作为抗原，注射免疫生长猪，目的是为了阻断其生理效应从而提高动物产肉率，同时为今后开展其他外源基因的原核表达研究提供技术支持。本试验首先根据基因库肌肉生长抑制素基因序列设计合成特异性引物，引物两端分别加上EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点及保护碱基，提取汉普夏猪的骨骼肌总RNA，用RT-PCR方法扩增肌肉生长抑制素全长基因，并将其克隆到pMD18-T载体上，测序后EcoRⅠ和SalⅠ双酶切，克隆到pET-30a中，构建原核表达载体pET-30a-M，将重组表达质粒转化至E.coli BL21(DE3)中，诱导表达。成功扩增出肌肉生长抑制素全长基因；克隆载体经过DNA序列测定，所得基因与国外报道的完全一致；成功构建原核表达载体pET-30a-M；经IPTG诱导，SDS-PAGE电泳结果证明产物约48ku，与预期大小相符。对表达条件进行优化，确定最佳表达条件为IPTG 0.4mmol／L，诱导时间为6h。将菌体进行超声破碎、SDS-PAGE检测表明，本研究发现MSTN在大肠杆菌中的表达主要以包涵体的形式存在。采用包涵体纯化的方法对蛋白进行粗提纯，然后利用重组蛋白6个连续的组氨酸，采用金属螯合亲和层析纯化重组蛋白，得到纯化的目的蛋白。利用获得的重组肌肉生长抑制素蛋白主动免疫生长育肥猪，考察重组蛋白对生长猪生长性能和肉用品质的影响。试验选用25±1.5kg健康三元(DLY)杂交猪27头，按体重相近的原则随机分成3个处理，每个处理3个重复，每个重复3头猪，在试验第1、15、29d分别注射生理盐水和不同剂量的重组蛋白。试验第49天每个重复选1头猪进行屠宰试验。结果表明：与对照组相比，免疫MSTN蛋白高剂量组、低剂量组猪在生产性能改善方面均呈现出明显的阶段性效应：3-4周低剂量组饲料效率提高，饲料转化率高于对照组。5-6周低剂量和高剂量组在平均日增重、饲料转化率都高于对照组。在胴体性状方面，高剂量组比对照组的瘦肉率提高了近3个百分点，而且无论是低剂量组还是高剂量组背膘厚均有所降低，眼肌面积提高。通过对猪肉品质相关指标测定结果的分析可以看出，与对照组相比，免疫组滴水损失减少，剪切力增加，其他指标无明显差异。综上所述，应用大肠杆菌表达的重组蛋白MSTN主动免疫动物后能产生抗体，具有一定的提高肌肉生长的作用，本研究为进一步开展MSTN的研究奠定了基础。