寿胎丸对复发性流产大鼠子宫蜕膜组织AQP7、AQP10蛋白表达的研究

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目的:采用免疫组化技术明确水通道蛋白7(AQP7)及水通道蛋白10(AQP10)在复发性流产(RSA)大鼠蜕膜中的差异表达及分布定位情况,从蛋白质分子水平研究寿胎丸及其活性成分治疗RSA可能的新机制以及新靶点,提高中药用于预防和治疗自然流产的水平,为中药防治RSA提供新的思路和实验依据。方法:将雌性老鼠60只与雄性老鼠30只按照2:1的比例合笼配对。观察到孕鼠妊娠后第一天。随机将60只孕鼠分为6个组:正常对照组(记为A组)、模型组(记为B组)、西药对照组((地屈孕酮)记为C组)、寿胎丸低剂量组(记为D组)、寿胎丸中剂量组(E组),寿胎丸高剂量组(记为F组),每组10只。观察到阴道涂片出现大量精子,发现雌鼠有阴道栓脱落则作为孕鼠妊娠的第1天;每组孕鼠(正常对照组除外)从妊娠第1天到妊娠第9天用2m L生理盐水溶解羟基脲(450mg·kg-1)每天下午进行灌胃;第10日早晨各孕鼠灌服2m L生理盐水配置米非司酮(RU486)4.0mg/kg溶液造复发性流产模型。另外每天上、下午对C组(3.02 mg/kg)、D组(0.5 g/kg)、E组(1 g/kg)、F组(2 g/kg)各组给予相应的治疗药物灌胃,4m L/d(上午、下午各灌2ml),生理盐水溶解。模型组与正常对照组给予等容量生理盐水,连续9天。至妊娠第11天麻醉处死大鼠,分离大鼠子宫蜕膜,固定包埋后切片备用。采用免疫组化检测AQP7及AQP10的定位及定量表达,采集图片后运用显微镜观测AQP7、AQP10在细胞中的表达部位,同时用IPP(Image-Pro)6.0软件分析图像,测量计算IOD/Area,以IOD/Area值作为半定量统计分析参数[1]。结果:1.AQP7、AQP10在SD大鼠子宫蜕膜中存在表达,胞膜、膜浆是其表达部位;在RSA大鼠子宫蜕膜中,AQP10的表达会下调,经不同因素干预后,地屈孕酮组、寿胎丸低中高剂量组大鼠蜕膜中AQP10的表达上调。寿胎丸对AQP7无明显调节作用。2.模型组与正常对照组相比较,AQP10的表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01),提示肾虚黄体抑制大鼠模型成功;寿胎丸低剂量组与地屈孕酮组比较示AQP10表达降低,差异具有统计学意义(P<0.01);寿胎丸各剂量组以及地屈孕酮西药对照组与模型组比较,结果提示AQP10的表达均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01);寿胎丸低中剂量组及西药对照组与高剂量组比较提示高剂量组AQP10的表达较其余组升高,差异具有统计学意义(P<0.01);寿胎丸中剂量组与地屈孕酮组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与正常妊娠组孕鼠相比,模型组孕鼠蜕膜组织中AQP7呈现低表达,差异无统计学意义(P>0.05);结论:1.复发性流产SD大鼠子宫蜕膜胞膜、胞浆是AQP7、AQP10的表达部位;2.在复发性流产SD大鼠子宫蜕膜中AQP10的表达下调,但对AQP7无意义;3.AQP10可能是寿胎丸安胎的作用靶点以及“肾主水”的分子物质基础。
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