花生粕多肽对高脂膳小鼠生长及脂代谢和肠道的影响

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目的:本实验以花生粕为主要原料,利用固态发酵的方法,以纳豆芽孢杆菌和红曲霉为发酵菌种,探究花生粕发酵物中多肽对高脂膳小鼠生长及脂代谢和肠道的影响,为花生粕资源的开发利用提供理论依据。方法:将50只雄性C57BL/6J小鼠按体重随机分为:空白对照组N(生理盐水)、模型组M(生理盐水)、阳性对照组Y(阿托伐他汀10mg/kg)、多肽低剂量组DL(多肽10mg/kg)、多肽高剂量组DH(多肽20mg/kg),每组10只。除空白对照组喂食基础饲料外,其余各组均喂食高脂饲料。灌胃剂量按照0.1ml/20g/d,实验持续6周。每天记录小鼠摄食量;每周记录小鼠体重及一般情况;眼球取血,全自动生化分析仪检测血清中脂质代谢相关指标;将小鼠处死后测量身长;立即取出小鼠心脏、肝脏、肾脏、脾脏,称重并计算脏器指数;医院送检检测全血中相关指标;试剂盒法检测肝脏组织中的瘦素含量;HE染色观察肝脏脂质沉积状况;HE染色观察小肠绒毛损伤状况;Western Blot法检测小肠闭锁小带蛋白ZO-1和连接蛋白Occludin的表达;收集盲肠内容物,进行16rs高通量测序,探究肠道内容物中菌群的丰富度。结果:经过不同剂量的花生粕多肽干预6周后,M组体重变化率要高于其他各组,DH组体重变化率最低;DH组和DL组小鼠身长高于其他各组。各组小鼠肾脏指数和心脏指数无明显差异(P>0.05);DH组的肝脏指数低于M组,且差异具有统计学意义(P<0.05);DH组的脾脏指数高于M组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。经过不同剂量的花生粕多肽干预6周后,与N组相比,M组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)含量均表现为上升趋势(P<0.05),而高密度脂蛋白(HDL)则表现为降低趋势(P<0.05),显示高脂模型小鼠造模成功;与M组相比,DL和DH组TC、TG、LDL含量均表现为下降的趋势(P<0.05),而HDL含量则表现为上升趋势(P<0.05)。M组小鼠血小板数目(PLT)显著降低,与N组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);而平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)和血小板压积(PCT)各组之间差异无统计学意义(P>0.05);经过花生粕多肽干预后,PLT与M组相比显著升高(P<0.05)。花生粕多肽干预组小鼠血清瘦素水平较M组有所降低,其中DH组小鼠血清瘦素水平降低最为明显(P<0.05)。花生粕多肽干预组较M组相比,肝脏组织脂肪空泡数目有所减少,细胞核形态规则,肝窦清晰可见,肝索排列紧密。经过不同剂量的花生粕多肽干预6周后,花生粕多肽干预组小鼠回肠绒毛有所增长,减轻了绒毛脱落现象。花生粕多肽干预组与模型组相比,显著上调了ZO-1、Occludin紧密连接蛋白的表达(P<0.05)。在门水平上,A组(空白对照组)和B组(模型组)排在前三位的物种为拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria),而C组(阳性对照组)、D组(花生粕多肽低剂量组)和E组(花生粕多肽高剂量组)排在前三位的依次为厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)。其中,拟杆菌门相对含量最高的为模型组(60.02%),空白对照组第二(48.39%),阳性对照组第三(29.99%),花生粕多肽高剂量组最少(8.71%)。厚壁菌门的水平上各组由高到低的顺序依次为花生粕多肽高剂量组、花生粕多肽低剂量组、阳性对照组、空白对照组、模型组。各组变形菌门的相对含量较高的为花生粕多肽低剂量组(5.73%)和空白对照组(4.97%),其次为花生粕多肽高剂量组(3.13%)和模型组(2.41%),最少的为阳性对照组(2.07%)。花生粕多肽高剂量组等级聚类曲线在横坐标上横跨宽度最广,在纵坐标上曲线下降最为平缓,说明花生粕多肽高剂量组物种丰度最高;模型组等级聚类曲线在横坐标上横跨宽带最窄,在纵坐标上曲线下降最为陡峭,说明其物种多样性在各组中最低,其余各组的物种多样性均高于模型组。结论:花生粕多肽可以促进小鼠的生长,其中DH组促进生长的效果优于DL组;花生粕多肽对高脂膳小鼠的脂代谢具有一定的调节作用;花生粕多肽可以改善肠道黏膜损伤,增加肠道菌群的丰度。
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