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目的:本课题以松果体分泌物,一种名为“Epithalamin”的缩氨酸为基础,人工合成的多肽“Epithalon”其结构为:Ala-Glu-Asp-Gly。研究其作用于人肝细胞L-02后对细胞的生长情况、细胞端粒长度以及细胞端粒酶活性所产生的影响。方法:(1)采用SPPS固相多肽合成法线性合成制备Epithalon多肽,重复(缩合—洗涤—去保护—中和—洗涤)操作,达到所要合成的肽链长度;最后将肽链从树脂上裂解下来,经过高效液相法(简称HPLC纯化法)纯化处理,运用核磁技术检测H谱、C谱对其进行进一步分析鉴定。(2)通过MTT法检测Epithalon多肽对人肝细胞株L-02增殖与活力的影响;用细胞形态学观察用药后细胞的生长情况。(3)用药一段时间后,运用端粒酶重复序列扩增——焦磷酸根酶联发光技术(TRAP-ELIDA)检测人肝细胞株L-02端粒酶活性,流式荧光原位杂交法(FLOW-FISH)检测端粒长度。结果:(1)核磁与质谱结合分析鉴定的结果是合成产物正是Epithalon多肽,只是还含少许杂质。(2)MTT法检测Epithalon多肽对人肝细胞株L-02增殖与活力的影响显示:细胞在2.5umol/l至25umol/l这段随药物浓度增大而增大。对L-20细胞增殖的促进作用逐渐增加,且对浓度的限制性不大。(3)运用端粒酶重复序列扩增——焦磷酸根酶联发光技术(TRAP-ELIDA)检测人肝细胞株L-02端粒酶活性,流式荧光原位杂交法(FLOW-FISH)检测端粒长度的变化,发现Epithalon多肽能有效的激活细胞端粒酶,虽然,L-20细胞是永生细胞,但端粒酶活性表达并不强,几乎没有,但加入Epithalon多肽后却有效提高了端粒酶的活性。端粒长度的检测结果显示,加入Epithalon多肽后细胞端粒的长度得到延长。结论:研究显示Epithalon多肽具有激活端粒酶,延长端粒的作用。从目前主要的衰老理论之一的基因程控学说(端粒理论)角度来说,Epithalon多肽能以激活端粒酶活性延长端粒进而达到延长细胞寿命、生物体寿命。且由于端粒缩短的减缓,则可能更好的起到稳定染色体的作用,减少染色体因不稳定而引起的畸变等,从而减少染色体畸变导致的癌症。衰老、癌症是多因素积累的结果,但从预防角度上,Epithalon多肽也可能会是一种可行的较安全的预防治疗性药物。