【摘 要】
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反式茴香脑是一种简单的苯丙素类化合物,在八角等植物中含量丰富,而且易于获取。中国是八角的主要原产地,而广西八角的出产量则占全国产量的90%。由于反式茴香脑生产各种茴香风
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反式茴香脑是一种简单的苯丙素类化合物,在八角等植物中含量丰富,而且易于获取。中国是八角的主要原产地,而广西八角的出产量则占全国产量的90%。由于反式茴香脑生产各种茴香风味的添加剂在食品、香料等轻工领域应用广泛,人们对于天然产物的需求日益增多,因而在近年来对反式茴香脑的生物降解的研究成为了一个新的方向。到目前为止,研究者们分离到一些能够降解反式茴香脑的菌株,并对这些菌株转化反式茴香脑的条件进行了优化,使转化效果得到一定的提升,但是从基因组水平上对反式茴香脑降解的研究却不多见。本文是在实验室分离出的一株能够转化反式茴香脑的Burkholderia sp.WGB30基础上,采用微型转座子对Burkholderia sp. WGB30进行随机突变,构建突变体库。实验以pTnMod-KmO为突变载体,pRK2073为帮助质粒,通过三亲结合的方法,利用抗性平板及PCR筛选,得到了一个含有11000个突变子的突变体库。利用反式茴香脑为单一碳源,从突变体库中共筛选到34株不能单一利用反式茴香脑的突变体。然后筛选出的突变株用M9液体培养基进行培养,在长到一定浓度后,向培养基中加入适量的茴香脑,28℃下培养24小时,将转化液用薄层层析进行检验。在薄层层析检测中发现,突变体1-8,14-16有茴香酸少量产生,突变体30-32有茴香醛产生,而且突变体30同时有茴香酸产生。由此1号-8号以及14号-16号突变体中转座子插入的位点可能在茴香酸降解功能相关的基因上,导致了茴香酸的累积。9号-13号、17号-28号、33号-34号突变体在茴香醛和茴香酸的位置上都没有出现反应,推测转座子插入位点可能在反式茴香脑代谢生成茴香酸这部分功能相关的基因上。突变体29在茴香醛相上有黑点,并在反式茴香脑和茴香醛之间也有黑点,推测该黑点可能是反式茴香脑转化生成茴香醛的中间产物,该突变位点可能在这种中间产物代谢有关的基因上。突变体32有茴香醛的相却没有茴香酸的相,推测该突变菌株可能在茴香醛转化生成茴香酸的过程中受阻。实验结果为进一步鉴定微生物转化茴香脑相关基因及分析代谢途径奠定了基础。
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