烟草灰霉病复合生防细菌的筛选及其防治效果测定

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烟草灰霉病是近年来广西烟草病害调查中当地新发现的病害。目前农业生产上防治灰霉病主要依靠化学药剂,而化学药剂容易造成病菌产生耐药性、环境污染等问题。随着越来越多的拮抗微生物陆续被发现,利用微生物防治烟草灰霉病具有广阔的发展前景。本研究在对烟草灰霉病菌内生拮抗细菌筛选的基础上,构建复合微生物并测定其对烟草灰霉病的防治效果,另对拮抗细菌的生防机制进行探讨,获得的研究结果如下:1、采用菌丝生长速率法从470株烟草内生细菌中获得对烟草灰霉病菌有拮抗作用的菌株70株,对该病菌有营养竞争作用的菌株32株;另以孢子萌发法获得对病菌孢子萌发抑制率较高的菌株72株;从中选择抑菌效果较好的27株生防菌,采取烟叶组织法进行复筛,有12株菌株的防治效果超过50%。对其中7株进行生防菌之间亲和性的测试,除菌株Y98外,其他菌株之间均表现亲和。2、根据生防菌株之间的亲和性及抑菌效果,选择5株生防菌株,结合其形态特征、生理生化性状、16S rDNA和gyrB基因序列分析,将菌株G59、G81和Y11鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),菌株Y88和Y141属于假单胞菌属(Pseudomonas)产荧光假单胞菌类群。3、对以上5株生防菌进行组合,有两株菌株组合、三株菌株组合和四株菌株组合3种不同的组合方式。在所有生防菌组合中,Y11+Y141菌株组合的防治效果最高为72.02%,Y11+Y88+Y141+G59菌株组合的防治效果最差,为42.41%。为了提高Y11+Y141菌株组合的防治效果,对它们的混配比例进行优化。试验结果显示,比例为2:1的防治效果比各单菌株以及其他混配比例处理的防治效果都高,为75.68%。4、选择Y11:Y141(2:1)的组合进行温室盆栽试验防治效果测定。从试验结果看,各处理的保护效果均比治疗效果高。Y11+Y141(2:1)、Y11、Y141和300mg/L的异菌脲各处理的保护效果分别为65.81%、57.91%、42.09%和94.66%;其治疗效果分别为59.51%、42.19%、34.50%和85.78%,复合菌株的防治效果高于单菌株。5、Y11和Y141两株生防菌的胞外代谢产物对供试的12种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用,抑菌谱较广。它们的胞外代谢产物对烟草灰霉病菌菌丝生长的抑制作用要强于挥发性代谢产物。通过光学显微镜观察,Y11和Y141两株生防菌的胞外代谢产物均能使灰霉病病菌菌丝形态发生显著变化,菌丝粗短畸形,部分原生质渗漏,细胞壁出现褶皱。
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