【摘 要】
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扬子鳄（Alligator sinensis）是我国特有的珍稀濒危野生动物,长期以来,由于环境恶化、栖息地丧失以及人类活动的影响,其野外种群的数量急剧下降,目前只有在安徽、浙江两省交界区域有所分布,种群数量已不足120条。为保护这一珍稀濒危物种的,我国政府已经采取了一系列措施。1972年将扬子鳄列为I级重点保护野生动物,1978年、1982年和1979年相继建立了安徽宣州扬子鳄繁殖研究中心、扬子鳄
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扬子鳄（Alligator sinensis）是我国特有的珍稀濒危野生动物,长期以来,由于环境恶化、栖息地丧失以及人类活动的影响,其野外种群的数量急剧下降,目前只有在安徽、浙江两省交界区域有所分布,种群数量已不足120条。为保护这一珍稀濒危物种的,我国政府已经采取了一系列措施。1972年将扬子鳄列为I级重点保护野生动物,1978年、1982年和1979年相继建立了安徽宣州扬子鳄繁殖研究中心、扬子鳄自然保护区、浙江长兴扬子鳄自然繁育研究中心等机构。为了保护扬子鳄的基因资源,本文以长兴扬子鳄自然繁育研究中心提供的血液样品为材料,以细菌人工染色体（BAC）为载体,成功建立了高质量的扬子鳄基因组BAC文库。以该文库为实验材料,构建了扬子鳄主要组织相容性复合体（MHC）II类基因和嗅觉受体（OR）基因的克隆重叠群,既验证了该文库的有效性,又对文库进行了基础研究的应用。其主要研究结果如下：1.以新鲜外周血为材料,利用pCC1BAC载体,成功构建了扬子鳄的基因组细菌人工染色体（BAC）文库。文库包含的216238个BAC克隆,保存于2254块96孔培养板上。经对随机挑取的150个BAC克隆进行电泳检测,计算出文库的平均插入片段为90kb,覆盖扬子鳄基因组约6.8倍（除去5.33%的空载体）。同时,从文库中获得任一单拷贝或多拷贝扬子鳄基因的概率为99.93%；2.运用4D-PCR文库筛选技术,建立了扬子鳄基因组BAC文库的高效PCR筛选文库。该文库包括46个超级库和1564（46×34）个1D、2D、3D、4D超级亚库。任一引物或探针只需80个PCR反应,即可从BAC文库中筛选到所需的阳性BAC克隆；3.用7对扬子鳄特异性PCR引物进行文库筛选,平均每对能够在文库中成功扩增到6.1个阳性克隆,表明了所建文库具有较高的覆盖率,并与文库覆盖率计算结果（6.8）基本达成一致。4.基于MHC II类以及OR基因的同源序列,成功设计了三对通用引物,并从扬子鳄基因组BAC文库中筛选到阳性BAC克隆的。5.以这三对引物为基点,运用BAC质粒的末端测序和染色体步移,进行了一系列BAC文库阳性克隆的筛选,成功构建了两个克隆重叠群（contig）。6.对OR基因克隆重叠群的9个BAC克隆进行测序,对所得数据进行分析,结果证明以上OR基因克隆重叠群的真实有效性,并对扬子鳄的OR基因进行了初步分析。
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