新鲜中药材因其含多种活性成分而具有一些独特的疗效。利用鲜药材榨汁制作鲜药倍受关注。鲜药加工利用的成败主要在于杀菌和保持其药理活性。蛹虫草具有广泛的药理活性,有重要的成药价值。为了有效杀灭蛹虫草鲜汁中的微生物,提高其药理活性,以实现蛹虫草鲜药开发的目的,本文以免疫抑制小鼠模型为研究的药理学指标,首先探讨鲜、干蛹虫草之免疫活性差异,然后研究其主要活性成分总多糖、虫草素和腺苷对鲜、干蛹虫草免疫活性的贡献,再采用组方法,并通过多元相关分析将鲜、干蛹虫草之免疫活性和其化学信息相关联,以明确鲜、干蛹虫草免疫活性差异的物质基础。以物质基础为蛹虫草鲜药开发的药化指标,探索超高压处理对蛹虫草鲜汁的有效杀菌工艺和保持其鲜药活性的较佳工艺,再对二者进行优化,并采用免疫学方法对优化的工艺进行验证。探索超高压处理对果胶酶和纤维素酶活性的影响,筛选合适的酶,以研究酶协同超高压杀菌保活工艺对蛹虫草中活性物质溶出量及其免疫活性的影响,并采用响应面法对酶协同超高压进一步增加蛹虫草鲜汁中活性物质溶出量的工艺进行优化。结果如下：1)鲜蛹虫草比干蛹虫草具有更强的免疫促进活性,其物质基础源于鲜草含有更高的虫草素、总多糖和重均分子量为300 kDa、250 kDa的多糖。与干蛹虫草相比,鲜蛹虫草对免疫抑制小鼠的脏器指数、巨噬细胞的吞噬活性、脾淋巴细胞的增殖能力、血液中的IL-2和INF-γ水平具有更强的促进作用。对鲜、干蛹虫草不同组方的药效和化学部位进行多元相关分析,结果表明不同组方的免疫活性与其虫草素和总多糖的溶出量密切相关,其在鲜草中的溶出量比其在干草中高252.95%和30.99%。免疫活性研究显示,鲜蛹虫草多糖的免疫促进活性强于于蛹虫草多糖,鲜草中的虫草素呈现免疫促进效应。采用高效液相色谱对鲜、干蛹虫草总多糖不同组方的分子量分布进行分析,运用多元相关分析将多糖不同组方的药效和其重均分子量相关联,结果显示重均分子量为300 kDa和250 kDa的多糖是鲜、干蛹虫草总多糖免疫活性差异的主要化学成分,其在鲜草中的溶出量比其在干草中高104.65%和123.71%。2)超高压有效杀菌和保活工艺为：420 MPa、12min、料液比1：3、加压1次。采用超高压处理,分别对蛹虫草鲜榨汁的杀菌和保活工艺进行优化,得超高压有效杀菌工艺为：261 MPa、14 min、料液1：2、加压1次,超高压较佳保活工艺为：压力420 MPa、时间12 min、料液比为3、加压1次,取两个工艺的子集得有效杀菌保活工艺：420 MPa、12 min、料液比1：3、加压1次。该工艺下,实际测得的细菌总数、酵母菌数、霉菌数、大肠杆菌数分别为728、67、51和0 cfu/g提取物,显著低于《中华人民共和国药典》2010版第三部口服给药制剂限定值。与超声波处理(对照)相比,该工艺将蛹虫草鲜药中虫草素和多糖的溶出量分别提高了36.79%和23.34%,并明显增强了鲜药的免疫促进活性。HPLC检测结果表明,该工艺有效的保留了重均分子量为300 kDa和250 kDa的多糖。3)纤维素酶协同超高压处理显著提高了蛹虫草鲜药的免疫促进活性。研究了超高压对果胶酶和纤维素酶活性的影响,结果显示,300-500 MPa的压力对果胶酶催化活性有抑制作用,对纤维素酶催化活性有促进作用。与未添加纤维素酶相比,纤维素酶协同超高压杀菌保活工艺将鲜蛹虫草汁中总多糖、虫草素、300 kDa和250 kDa多糖的溶出量进一步提高了23.2%、6.786%、69.56%和49.17%,并进一步增强了蛹虫草鲜药的免疫促进效益。对纤维素酶协同超高压增活工艺进行优化,得最佳增活工艺：410 MPa、14 min、料液比1：2.5、酶添加量2.5%、加压1次。该工艺将总多糖、虫草素、300 kDa和250 kDa的多糖的rong进一步提高了24.21%、7.45%、75%和48.89%。微生物检测结果显示,细菌总数、酵母菌数、霉菌数、大肠杆菌数的实测值为654 cfu/g、 41 cfu/g、44 cfu/g、0 cfu/g,均明显低于《中华人民共和国药典》2010版第三部口服给药制剂规定的微生物限量。综上,采用超高压加工技术不仅能实现蛹虫草鲜药的杀菌目的,还能提高其鲜汁中活性物质的溶出量,增加其生物利用度,从而进一步增强鲜药的药理活性。