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研究目的:(1)分析针刺治疗前后CFS患者NKCC及NFAT2蛋白活化程度和血清IFN-γ表达水平,初步探讨针刺调节CFS患者免疫功能的临床效应。(2)探讨针刺是否可通过miR-184/NFAT2/NKCC信号通路改善NKCC发挥其免疫调节作用。研究方法:(1)临床试验:(1)通过严格的纳入标准共招募健康受试者和CFS患者各30例。以健康受试者为对照,以CFS患者为研究对象,采用LDH法检测外周血NKCC,WB法检测NK细胞内NFAT2及p-NFAT2蛋白表达水平,采用ELISA法检测血清IFN-γ表达,分析其特征。(2)将30例CFS患者随机分为针刺组(A组,n=14)和安慰针刺组(B组,n=16),连续针刺6周,通过A、B两组自身治疗前后及治疗后组间差异比较,分析针刺对CFS患者NKCC及其NFAT2、p-NFAT2蛋白和血清IFN-γ表达水平的调节作用。(2)动物实验:将40只SD雄性大鼠随机分为A组(空白组)、B组(模型组)、C组(模型+针刺组)、D组(模型+针刺+miR184 antagomir组),每组10只。B、C、D三组采用“慢性束缚+力竭游泳”复合应激法造模,通过力竭游泳实验、悬尾实验、旷场实验判定造模是否成功。治疗期间,A、B两组每天捆绑固定15分钟,不做针刺干预;C、D两组行针刺治疗,D组在每周治疗前第一天注射miR184 antagomir。连续针刺3周,采用RT-q PCR检测各组miR-184表达;各组NKCC、NFAT2蛋白及血清IFN-γ表达检测方法同临床试验。由于目前没有大鼠p-NFAT2抗体,故只能通过NK细胞胞浆和胞核内NFAT2蛋白表达水平来反映NFAT2脱磷酸化程度和活化程度。研究结果:(1)临床试验:(1)与健康受试者相比,CFS患者NKCC及血清IFN-γ表达均显著降低(P=0.013,P<0.01),胞浆NFAT2及p-NFAT2蛋白表达均显著下降(P<0.01),胞核NFAT2蛋白表达显著升高(P<0.01)。(2)与治疗前相比,A组治疗后NKCC显著升高(P<0.05),血清IFN-γ无显著性差异(P>0.05),胞浆NFAT2及p-NFAT2蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),胞核NFAT2蛋白表达显著降低(P<0.01);B组NKCC及血清IFN-γ表达均无显著性差异(均P>0.05),胞浆NFAT2及p-NFAT2蛋白表达均显著升高(均P<0.01),胞核NFAT2蛋白表达显著降低(P<0.01)。(3)与B组相比,A组治疗后NKCC显著提高(P<0.01),血清IFN-γ、胞核NFAT2、胞浆NFAT2及p-NFAT2均无显著性差异(均P>0.05)。(2)动物实验:(1)miR-184表达:与A组相比,B组miR-184表达显著下降(P<0.01);与B组相比,C组miR-184表达显著升高(P<0.01);与C组相比,D组miR-184表达显著下降(P<0.01)。(2)NFAT2蛋白表达:与A组相比,B组大鼠胞核NFAT2表达显著升高,胞浆NFAT2表达显著下降,差异均具有统计学意义(P<0.01);与B组相比,C组大鼠胞核NFAT2表达显著降低,胞浆NFAT2表达显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.01);与C组相比,D组胞核NFAT2表达显著升高,胞浆NFAT2表达显著下降,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。(3)NKCC:与A组相比,B组NKCC显著下降(P<0.01);与B组相比,C组NKCC显著升高(P<0.01);与C组相比,D组NKCC显著下降(P<0.01)。(4)血清IFN-γ表达:针刺治疗后,与A组相比,B组IFN-γ表达显著下降(P<0.01);与B组相比,C组IFN-γ表达显著升高(P<0.01);与C组相比,D组IFN-γ表达显著下降(P<0.01)。研究结论:(1)与健康受试者相比,CFS患者存在NKCC降低和血清IFN-γ表达下降,同时NK细胞内NFAT2活化。(2)与安慰针刺相比,针刺可有效提高CFS患者NKCC和血清IFN-γ表达,其临床效应可能与诱导miR-184表达,抑制NK细胞内NFAT2活化,从而发挥对下游通路的调节作用有关。(3)miR-184/NFAT2/NKCC信号通路可能是调节CFS免疫功能紊乱的可能机制之一,而NFAT2活化是否具有特异性,还有待进一步深入研究。