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牛樟芝是担子菌科的一种药用真菌。其中4-乙酰基安卓奎诺尔B(下简称4-AAQB)这种泛醌类的小分子物质对于治疗肝炎和肝癌具有很好的效果。因此,牛樟芝在液态深层发酵时产生特有的泛醌类物质4-AAQB具有极高的研究价值。对于4-AAQB的研究现状,存在着如:产量低,生产时间长,提取分离困难等科研困难,这些问题亟待解决。为了将牛樟芝中生理活性物质4-AAQB更广泛的用于国际公认的医学手段中,本研究通过对牛樟芝代谢物进行差异性分析的研究手段,提升4-AAQB产量,并对其分离纯化工艺进行了探索,具体工作如下:1、优化了牛樟芝代谢物提取的分析方法:整瓶取样,PBS缓冲液冲洗菌体,加入等体积淬灭液(-40 ℃甲醇)淬灭,离心后弃上清液加入适量液氮淬灭。处理后菌体置于研钵中,进行液氮研磨。每10 mg样品粉末中添加1 mL提取剂,离心取上清液。向剩余悬浊液中再次加入0.5 mL提取剂,离心取上清液,将两次所得上清液混合,离心取1 mL备用。实验中最终采用的提取剂为90%甲醇/水。最后对样品进行硅烷化处理备用。2、运用代谢组学的数据挖掘方法,对牛樟芝在不同碳源和不同时间点的差异性相关性进行分析。取4个关键时间节点,横向在同一时间点对比两种碳源的代谢物,纵向在同一种碳源的条件下,对比不同发酵时间的代谢物。分别找到可以提升4-AAQB产量的外源添加的前体物质,最终选择了:邻苯二甲酸,油酸,D-松醇,肌醇,L-谷氨酰胺,D-山梨醇,芳樟醇进行外源添加。3、在牛樟芝发酵生产4-AAQB过程中,对得到的牛樟芝代谢过程中的中间差异代谢物进行外源添加优化。其中在牛樟芝发酵过程中外源添加0.1%邻苯二甲酸,0.3%的油酸,0.2%的肌醇和0.3%的D-松醇时,牛樟芝发酵产4-AAQB的实验结果要较空白对照组好3至5倍。外源添加不同时间的差异代谢物时,可以将牛樟芝的发酵周期从原本的20天缩短至16天,同时还可提升牛樟芝的生物量和4-AAQB的产量。4、初步对4-AAQB分离纯化工艺进行探索。对4-AAQB粗品进行自然风干,并用不同体系溶液对干燥后样品进行萃取除杂,得到含有4-AAQB成分的样品,在柱层析分离过程中,样品添加量为层析柱填料质量的1/40,硅胶柱的径高比为1:25时,含有4-AAQB成分的样品纯度达到55.47%,且对其在TLC、HPLC以及质谱鉴定中,所得样品中含4-AAQB组分。