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猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)与猪群发生的多种疾病相关，包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、A2型先天性震颤(CT)等，其中以PMWS最为严重，已经给全世界养猪业带来了很大的经济损失，国内也未能幸免。目前，国内还没有效的疫苗控制此疾病的发生。本实验对猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因在巴斯德毕赤酵母中的表达进行研究，为研制PCV2基因工程苗提供基础。
根据GenBank中发表的已知PCV2全基因序列，设计并合成了两对引物P1/P2、P3/P2，根据该基因的酶切图谱和表达载体多克隆位点的分析，在上游引物P1、P3中加入了限制性内切酶XhoⅠ，在下游引物P2中加入了限制性内切酶NotⅠ；从原核重组表达质粒PMD18-T-PCV2中扩增猪圆环病毒Ⅱ型的目的基因，扩增长度分别为576bp和702pb。将目的片断与表达载体pPICZαC分别经过XhoⅠ和NotⅠ双酶切，然后连接转化大肠杆菌，得到重组表达质粒pPICZαC-PCV2—1、pPICZαC-PCV2—2，并送公司测序鉴定。结果显示目的基因已经正确插入表达载体pPICZαC。重组表达质粒经SacⅠ单酶切电泳后，纯化回收，电击转化感受态的毕赤酵母工程菌X—33，转化菌液用冰山梨醇29℃温育培养30分钟后，加入1mL YPD29℃振摇1h后涂布于YPDS+ZeocinTM选择性培养基，置29℃温箱培养3～5天，结果获得多个单菌落。通过提高抗生素浓度，筛选出具高抗性的转化子。先用BMGY培养基(含甘油)激活培养过夜，OD值达2～6。收集菌液，3000rpm离心2min，弃上清。用BMMY培养基(含甲醇)重悬菌体，置摇床29℃、250rpm诱导表达。每24h添加100％甲醇，保持终浓度为1.0％。诱导表达4天后，收集菌液，离心，取上清。取少量上清液进行SDS-PAGE电泳分析，分别可见一条分子量约20KD清晰蛋白条带和一条分子量约26KD清晰蛋白条带，与理论值相符，而空载体转化宿主菌的对照未发现特异的蛋白条带。表达蛋白进行Western—Blot分析，显示表达蛋白与小鼠抗猪圆环病毒抗体能发生特异的抗原—抗体反应，具有免疫原性。
综上所述，本研究成功地在毕赤酵母中分泌表达出猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因的蛋白，该蛋白所制成的疫苗能够刺激小鼠产生抗体，为预防和治疗猪圆环病毒所引起的疾病具有潜在的应用价值。