【摘 要】
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本论文采用组织块分离法和热激稀释法分离木麻黄内生真菌和根际微生物,通过菌落观察并结合分子生物学方法对分离到的内生真菌和根际微生物进行鉴定,并分析其生物多样性。进一步通过液体发酵,提取并制备木麻黄内生真菌和根际微生物的次生代谢产物,采用TLC-MTT-生物自显影法测定了次生代谢产物对木麻黄青枯病菌等5种供试细菌的抗细菌活性。主要结果如下:1、从木麻黄中共分离出20株内生真菌,分别命名为Cef-1～C
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本论文采用组织块分离法和热激稀释法分离木麻黄内生真菌和根际微生物,通过菌落观察并结合分子生物学方法对分离到的内生真菌和根际微生物进行鉴定,并分析其生物多样性。进一步通过液体发酵,提取并制备木麻黄内生真菌和根际微生物的次生代谢产物,采用TLC-MTT-生物自显影法测定了次生代谢产物对木麻黄青枯病菌等5种供试细菌的抗细菌活性。主要结果如下:1、从木麻黄中共分离出20株内生真菌,分别命名为Cef-1～Cef-20,经鉴定后分别属于15个不同的属,其中Botryosphaeria sp.（Cef-1、Cef-12、Cef-16）分离频率最高,为20%,属于优势属。通过对木麻黄内生真菌生物多样性的分析得出,木麻黄内生真菌的Margalef丰富度指数（D）、Simpson优势度指数（D）、Shannon-Wiener多样性指数（H）和Pielou均匀度指数（J）的值分别为4.67、0.92、2.59和0.96。通过测定木麻黄内生真菌次生代谢产物的抗细菌活性,发现Cef-17（Eutypella sp.）、Cef-18（Penicillium sp.）和Cef-20（Penicillium sp.）对5种供试细菌均表现出较强的抑制活性,尤其是Cef-20,抑菌斑直径大于10mm,Rf值在0.00-0.95均有分布,化合物极性分布范围较广。2、从根际土壤中共分离出25株真菌,命名为Cesf-1～Cesf-25,经鉴定后分别属于13个不同的属,其中Penicillium sp.（Cesf-3、Cesf-5、Cesf-7、Cesf-13、Cesf-16、Cesf-18）具有最高的分离频率,为24%,属于优势属。通过对木麻黄根际真菌生物多样性分析得出,其Margalef丰富度指数（D）、Simpson优势度指数（D）、Shannon-Wiener多样性指数（H）和Pielou均匀度指数（J）的值分别为2.08、0.88、2.34和0.91。通过测定木麻黄根际真菌次生代谢产物的抗细菌活性,发现Cesf-9（Aspergillus sp.）、Cesf-11（Paecilomyces sp.）、Cesf-13（Penicillium sp.）和Cesf-16（Penicillium sp.）的次生代谢产物对5种供试细菌均有较好的抑制活性,尤其是Cesf-16,Rf值在0.00-0.70之间,抑菌斑直径大于10 mm。3、从根际土壤中共分离出18株放线菌,命名为Ceaf-1～Ceaf-18,经鉴定后分别属于7个不同的属,其中Streptomyces sp.（Ceaf-1、Ceaf-4、Ceaf-6、Ceaf-9、Ceaf-12、Ceaf-15、Ceaf-16）具有最高的分离频率,为38.9%,属于优势属。通过对木麻黄根际放线菌生物多样性分析得出,其Margalef丰富度指数（D）、Simpson优势度指数（D）、Shannon-Wiener多样性指数（H）和Pielou均匀度指数（J）的值分别为2.08、0.77、1.67和0.86。通过测定木麻黄根际放线菌次生代谢产物的抗细菌活性,发现Ceaf-3（Leclercia sp.）、Ceaf-13（Enterobacter sp.）和Ceaf-14（Bacillus sp.）对5种供试细菌的抑制活性较其它菌株要强,抑菌斑直径几乎都在5-10 mm之间。本论文结果初步阐明了木麻黄内生真菌和根际微生物对木麻黄青枯病菌的抑制活性,木麻黄内生真菌中的Cef-20、根际真菌中的Cesf-16和根际放线菌中的Ceaf-3对木麻黄青枯病菌具有较强的抑制活性,可作为候选菌株进一步研究,为木麻黄青枯病菌的防治以及生物源农药的开发和利用提供理论依据。
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