PCDHα基因在海马神经元轴突与髓鞘生长发育中的作用实验研究

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目的:观察Pcdhα对神经元轴突生长以及轴突髓鞘化的影响,检测Pcdhα-del小鼠大脑m RNA表达差异,主要检测轴突发育成熟相关基因表达差异。方法:利用Pcdhα-del小鼠杂合子与杂合子交配,提取E17.5(即胎龄17.5天)成对的纯合子与野生型小鼠海马进行神经元原代培养。将培养一天的神经元利用免疫荧光进行标记,共聚焦显微镜拍照,Image J处理图片并测量轴突长度。利用Pcdhα-del小鼠杂合子与杂合子交配,选取P21(即小鼠出生后第三周)成对的纯合子与野生型小鼠海马切片固定,透射电镜观察小鼠的轴突髓鞘化程度的变化。利用Pcdhα-del小鼠杂合子与杂合子交配,选取E17.5成对的纯合子与野生型小鼠,取海马进行RNA-sequence,测序结果利用RT-q PCR验证。结果:敲除Pcdhα后神经元轴突生长缩短,轴突髓鞘化程度延迟且髓鞘排列散乱,且轴突延伸与轴突导向以及脊髓发育的相关基因表达量下降。结论:Pcdhα对胚胎期小鼠神经元轴突的生长以及出生后小鼠神经元轴突的髓鞘化起到一定作用,Pcdhα影响中枢神经系统早期发育特别是轴突生长相关基因的表达。
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