[目 的]研究含WW域的氧化还原酶（WW domain containing oxidoreductase,WWOX）基因对GBC-SD胆囊癌细胞迁移、侵袭的影响,研究过表达 WWOX 对缺氧诱导因子-1α（Hypoxia inducible Factor-1α,HIF-1α）、血管内皮生长因子-A（vascular endothelial growth factor-A,VEGFA）表达水平的影响以及过表达WWOX对胆囊癌细胞促血管生成作用的影响,探究WWOX在胆囊癌细胞迁移侵袭中的作用并对其可能的作用机制提出初步探讨。[方法]将WWOX过表达质粒和空载质粒分别和包装质粒混合形成DNA-EndoFectin转染复合物。再将转染复合物转染293T细胞获得WWOX过表达慢病毒颗粒和空载慢病毒颗粒。将WWOX过表达慢病毒感染的GBC-SD胆囊癌细胞作为过表达组（WWOX组）,空载慢病毒感染的GBC-SD胆囊癌细胞作为阴性对照组（NC组）,未感染的GBC-SD胆囊癌细胞作为空白对照组（GBC-SD组）,并用嘌呤霉素进行稳转株的筛选。通过qPCR、Westernblot、免疫荧光染色法分别检测各组GBC-SD胆囊癌细胞中WWOX的mRNA和蛋白的表达情况。细胞划痕实验、Transwell小室迁移实验检测各组GBC-SD胆囊癌细胞迁移能力的变化。Transwell小室侵袭实验检测各组GBC-SD胆囊癌细胞侵袭能力的变化。通过qPCR和Westernblot检测各组GBC-SD胆囊癌细胞中HIF-1α、VEGFA的mRNA和蛋白表达水平,ELISA检测感染GBC-SD细胞48h后各组GBC-SD胆囊癌细胞上清培养液中HIF-1α、VEGFA的胞外分泌水平。收集感染GBC-SD胆囊癌细胞48h后各组胆囊癌细胞的上清培养液,分别制成条件培养基。用于培养HUVEC血管内皮细胞,观察小管形成情况,评估WWOX对胆囊癌细胞促血管生成作用的影响。[结果]1.成功包装WWOX过表达的慢病毒颗粒并收集用于后续体外细胞实验。2.qPCR、Westernblot、免疫荧光染色实验结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,WWOX过表达组的GBC-SD胆囊癌细胞中WWOX的mRNA和蛋白表达水平明显升高,这表明WWOX过表达慢病毒成功感染了 GBC-SD细胞。3.细胞划痕实验结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,WWOX过表达组的GBC-SD胆囊癌细胞的划痕愈合速率明显减慢。Transwell小室迁移实验结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,WWOX过表达组发生迁移的GBC-SD胆囊癌细胞数量明显减少。Transwell小室侵袭实验结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,WWOX过表达组穿过matrigel胶的GBC-SD胆囊癌细胞数量明显减少。4.qPCR和Westernblot实验结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,WWOX过表达组的GBC-SD胆囊癌细胞中HIF-1α、VEGFA的mRNA和蛋白表达水平明显降低;ELISA实验结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,WWOX过表达组的GBC-SD胆囊癌细胞上清培养液中HIF-1α、VEGFA的胞外分泌量明显降低。5.小管形成实验结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,WWOX过表达组的GBC-SD胆囊癌细胞上清液来源的条件培养基中HUVECs内皮细胞小管形成的节点数量、交叉数量、总长度、分支长度明显减少,WWOX过表达可抑制GBC-SD胆囊癌细胞对血管内皮细胞小管形成的促进作用。[结论]过表达WWOX基因能明显抑制GBC-SD胆囊癌细胞的迁移和侵袭能力,可能的作用机制是过表达WWOX能下调GBC-SD胆囊癌细胞中HIF-1α、VEGFA的mRNA和蛋白的表达水平和胞外分泌量,并抑制GBC-SD胆囊癌细胞的促血管生成作用。