【背景】肝细胞癌（HCC，以下简称肝癌）是最常见的恶性肿瘤之一，但其发生发展的分子机制尚未完全清楚。MicroRNA（miRNA）是近年来在生物体内发现的一大类长度约22核苷酸左右的内源性非编码小RNA。它通过转录后抑制或靶mRNA降解参与细胞增殖、分化、凋亡等生物学过程，目前已鉴定出千余个。miRNA呈现组织特异性表达，可以有多个靶基因。研究发现，miRNA与细胞的癌变有着极为密切的关系。最近的研究表明，miRNA在人类恶性肿瘤中发挥促癌或抑癌的作用。对于miRNA表达调控的研究将是针对人类恶性肿瘤预防的一种新策略。由于miRNA具有“一对多”的作用方式，可同时调控多个蛋白质编码基因，参与多条与肿瘤发生发展相关的分子通路，所以靶向miRNA的干预能更有效地控制甚至逆转涉及多基因改变的肿瘤恶性表型。然而，miRNA是如何参与肝癌的发生发展？有哪些miRNA参与？它们的作用机制如何？靶向miRNA的干预治疗是否能逆转肝癌细胞的恶性表型？上述问题还远未阐明，miRNA在肝癌发生发展中的作用及作用机制仍需进一步的研究和探索。【目的】筛选、鉴定肝癌中差异表达的miRNA，研究miRNA分子在肝癌发生发展过程中的作用及其机制，进一步从新的角度理解肝癌的发生，为肝癌的早期预防、早期诊断以及选择合适的靶点进行干预、治疗提供新的理论依据。【方法】1.根据文献报道的芯片筛选结果，选取了miR-199a-1、miR-125a、miR-125b、miR-373、miR34a五个miRNAs分子，对18例肝癌、癌旁及部分转移灶的冰冻和石蜡包埋组织标本，通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测、比较肝癌组织和癌旁组织的表达水平，鉴定差异最明显的miRNA分子。2.补足40例肝癌、癌旁及部分转移灶的冰冻和石蜡包埋组织标本，通过qRT-PCR检测肝癌组织及癌旁组织标本中miR-199a-1的表达水平，分析miR-199a-1的表达水平与肝癌临床病理参数的关系。3.构建、扩增miR-199a-1的慢病毒表达载体及其阴性对照载体，分别感染miR-199a-1低表达的肝癌细胞系HepG2，建立稳定上调miR-199a-1的肝癌细胞系，用MTT、平板克隆、流式细胞术及裸鼠成瘤等实验，在体外和体内观察miR-199a-1对肝癌细胞生长、增殖的影响。4.利用生物信息学软件（PicTar、MiRanda、TargetScan等）预测miR-199a-1可能调控的靶基因；通过荧光素酶报告基因实验、半定量PCR和Western blot对候选靶基因进行验证，明确miR-199a-1对其靶基因FZD7的调控作用及两者在肝癌细胞及临床肝癌组织中的表达相关性；Westernblot检测miR-199a-1稳转细胞系中miR-199a-1上调对FZD7通路的影响。【结果】1.在选取的五个肝癌差异表达miRNA分子中，miR-199a-1的差异表达最为显著，肝癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织，提示miR-199a-1可能是参与肝癌发生发展过程中的关键分子之一。2. miR-199a-1的表达水平与肝癌临床病理参数的分析结果表明，其表达降低的程度与肝癌的临床分期、淋巴结转移以及肝癌患者的预后密切相关。3. miR-199a-1高表达慢病毒感染肝细胞，建立稳转细胞系。MTT结果显示miR-199a-1上调表达能显著抑制肝癌细胞的增殖能力；平板克隆形成实验显示miR-199a-1上调表达的肝癌细胞集落生长能力显著降低；流式细胞术检测发现阴性对照组和亲本HepG2细胞系增殖指数（PI）分别为60.7和63.9，明显高于对照组miR-199a-1高表达的HepG2细胞系的PI值40.8。实验结果提示miR-199a-1高表达细胞系发生细胞周期G1期阻滞；裸鼠体内成瘤发现稳定高表达miR-199a-1的肝癌细胞系皮下接种BALB/c裸鼠40天后，肿瘤生长缓慢，实验组瘤体显著小于对照组。体内外功能研究表明miR-199a-1可以抑制肝癌的增殖。4.生物信息学预测提示，FZD7可能是miR-199a-1的靶基因之一。上调miR-199a-1的肝癌细胞系与其阴性对照细胞系相比，FZD7表达明显降低，与miR-199a-1的表达成负相关性。在肝癌组织标本中，FZD7在肝癌中表达明显高于癌旁组织。Western blot检测经典Wnt信号通路的靶基因β-catenin，Jun, Cyclin D1和Myc均有不同程度的降低。【结论】1. miR199a-1在肝癌细胞和肝癌组织中表达显著降低，其表达降低的程度与肝癌的临床分期、淋巴结转移以及肝癌患者的预后密切相关。2. miR-199a-1可以通过调节细胞周期G1阻滞来抑制体内、外肝癌细胞增殖能力。3. miR-199a-1通过负性调控细胞膜受体FZD7表达，影响经典的Wnt通路发挥抑癌作用。