β-伴大豆球蛋白β亚基适配体的筛选和检测

来源 :江南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lych001
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
β-伴大豆球蛋白是由α′(76k Da)、α(72k Da)和β(54k Da)三个亚基组成的一种重要的大豆抗原蛋白,可引起仔猪和其他动物严重的过敏反应,如腹泻、生长机能下降甚至死亡。亚基三聚体中,β亚基最为稳定,不易去除,是主要的营养抑制剂之一,可用于评价β-伴大豆球蛋白的含量水平。然而,目前并没有有效的方法可对其进行快速检测。因此,本研究拟设计一种高效、稳定、简便的β亚基检测方法用于大豆及其副产品的品质把控。首先根据等电点不同,采用等电点沉淀法分离纯化得到7S球蛋白β-伴大豆球蛋白。在β-伴大豆球蛋白中,α′和α亚基是亲水性多肽,β亚基是疏水性多肽且分子质量存在差异,故使用苯基疏水柱和葡聚糖凝胶柱(Sephadex 200)依次纯化得到β亚基,利用Quantity One软件和Bradford法分别计算β亚基样品的纯度(97.8%)和质量浓度(0.6g·L-1),均达到适配体筛选的要求。然后使用高亲和力修饰适配体筛选试剂盒X-Aptamer,经过初筛和复筛,获得与β亚基特异性结合的适配体。将结合的序列解离并洗脱进行二代测序,得到丰度最高的10条序列,其平均长度在40 bp左右。选取丰度最高的序列命名为βA-1,实时荧光定量PCR(Real-time Quantitativepolymerase chain reaction,q PCR)测定发现βA-1和β亚基的解离常数(Kd)为6.9 nmol·L-1,表明筛选获得的适配体βA-1具有较高的亲和力,可用于适配体传感器的建立。使用最优的βA-1适配体序列结合纳米金(Gold nanoparticles,AuNPs)比色法设计了一种检测β-伴大豆球蛋白β亚基的传感器。得到最佳的检测条件为:AuNPs比例为62.5%,Na Cl的浓度为0.3 mol·L-1,适配体浓度为0.5μmol·L-1。利用构建的AuNPs-适配体传感器对纯化的β亚基进行检测,当β亚基浓度在0-87 nmol·L-1范围内时,A600/A520随着β亚基浓度的升高而增大,并在7-57 nmol·L-1范围内呈现良好的线性关系(R~2=0.98),检测限为2.58 n M(3S/N)。随后又对传感器的专一性进行验证,发现干扰蛋白对传感器的响应较小,表明该方法具有较好的特异性。将终浓度为20、50、70 nmol·L-1的β亚基分别加入到稀释的豆浆溶液中来验证该方法的实用性,利用上述传感器进行计算,豆浆样品中的β-伴大豆球蛋白β亚基的回收率为95.55%-104.88%,表明该方法能够较好地应用到实际样品的检测。最后,利用碱性蛋白酶酶解模拟豆粕发酵处理验证该传感器对实际样品检测的操作可行性,在此基础上对关键影响因素进行分析,最终用于菌酶协同发酵豆粕样品的评价。适配体传感器对发酵豆粕样品中β-伴大豆球蛋白β亚基检测的最佳稀释倍数为10-50倍,经过菌酶协同发酵24 h后,豆粕β-伴大豆球蛋白β亚基降解率为87.81%,较单独以碱性蛋白酶处理时提高了6.91%,表明适配体传感器可用于发酵豆粕中β-伴大豆球蛋白β亚基的检测。
其他文献
焦糖色素是黄酒中常用的着色剂。焦糖色素含有多种风味物质且成分复杂,可能会对黄酒的风味,稳定性和安全性产生一定的影响,然而目前这方面尚缺乏研究和数据支撑。本课题研究了黄酒中常用的亚硫酸铵法焦糖色素(A、H、Z)和普通法焦糖色素(W、J)对黄酒风味、蛋白质稳定性和关键风险物质4-甲基咪唑的影响,并探究了焦糖色素同黄酒蛋白分子和风味物质分子之间的相互作用。主要结果如下:(1)比较了两类焦糖色素的物理化学
浆果,是一类肉质柔软、多汁液水果的总称,富含多种维生素、抗氧化活性物质、人体必需氨基酸、微量元素和水溶性纤维,但由于高含水率特性,采后新鲜浆果容易发生微生物侵染或机械损伤,导致腐烂变质。采用干燥的加工方式是延长浆果货架期的有效方法,随着人们对高品质浆果类干制品需求的提升,开发节能保质的浆果干燥技术尤为重要。真空冷冻干燥能够较好的保留干燥产品的色、香、味、形以及营养组分,但由于效率低、能耗高限制了其
低聚异麦芽糖(isomaltooligosaccharides,IMOs)是葡萄糖单元以至少一个α-1,6糖苷键连接形成的聚合度在2~10之间的寡糖混合物,主要成分是异麦芽糖,异麦芽三糖(isomaltotriose,IG3)和潘糖等。IMOs不易被人体消化酶利用,具有低血糖指数特征,可用于糖尿病患者的健康糖替代品。此外,IMOs还可被肠道益生菌双歧杆菌分解利用,产生短链脂肪酸,抑制肠道有害菌生长
拉格啤酒酵母是我国啤酒酿造的主要菌种。酵母的絮凝为工业生产提供了有效、便利的产物和细胞的分离方式,大幅节约了生产成本,且有助于酵母细胞的回收和再利用。酵母的絮凝受到遗传背景、环境压力等多种因素的影响,调控机制十分复杂。目前,关于拉格酵母在酿造过程中的絮凝调控机理研究尚不充分,不利于酵母絮凝突变株的选育及酿造过程中酵母絮凝行为的控制。论文以工业啤酒酵母G03及其絮凝突变株G03-10和G03-24为
啤酒是世界上第三受欢迎的饮料,仅次于水和茶。中国占全球啤酒产量的两成,其中工业生产的Lager型啤酒占总产量的90%以上。国内啤酒工业在努力提高产品质量的同时,希望能够降低生产能耗。高浓酿造技术对于啤酒工业意义重大,在工业啤酒生产中应用高浓酿造技术可以降低成本、减少排放并节约水资源等。但是高浓酿造亦存在诸多不足,高浓酿造中酵母发酵性能会显著下降,同时啤酒风味物质不呈比例增加。目前对于高浓酿造的研究
纯棉织物因吸湿透气、手感柔软穿着舒适、可降解等优点在服装行业中一直备受消费者关注,但棉织物也存在易起皱变形、洗后需熨烫、不易护理等严重缺陷,影响其服用性能,给人们的生活造成了很多困扰。为使棉织物达到平整、洗后易护理的效果,生产商会对其进行免烫整理,在整理过程中织物的物理机械性能等方面发生了明显的变化,折皱回复角增大的同时,织物强力却发生明显下降,影响织物耐用性。因此,在提高免烫整理效果的同时实现高
D-阿洛酮糖作为一种热量低、口感好并且有多种生理活性的天然代糖产品,近年来市场需求激增。自然界中D-阿洛酮糖含量极其稀少,目前工业上主要利用D-阿洛酮糖3-差向异构酶(D-psicose 3-epimerase,DPE)催化D-果糖发生异构化反应来制备D-阿洛酮糖,其中生产DPE的成本占制备D-阿洛酮糖成本的很大比例。但是现有DPE普遍存在热稳定性差、储存稳定性差等问题,限制了D-阿洛酮糖的进一步
2’-岩藻糖半乳糖(2’-Fucosyllactose,2’FL)是母乳中含量最丰富的一种母乳低聚糖,可选择性地促进双歧杆菌的增殖。目前双歧杆菌对2’FL的利用的研究集中在单一菌株利用2’FL的关键酶基因及利用机制,但缺少对双歧杆菌利用2’FL的种属规律以及可利用2’FL双歧杆菌对于健康宿主影响的相关研究。因此,本文旨在基于表型和基因型的关联性分析,评估并比较不同双歧杆菌利用2’FL的能力并进一步
糙米营养丰富,但食用口感较差,改进糙米的加工方法可提高糙米食品品质。本文将糙米的米糠和白米分开处理,对米糠采用挤压膨化和球磨法微细化,另将白米适当粉碎,再把两者混合制得重组糙米粉,加工成糙米发糕。主要研究了经挤压膨化和球磨后的米糠微粉的物理性质、营养性质和微观结构的变化,并比较了重组糙米粉与整粒粉碎糙米粉、大米粉在糊化性质、热力学性质方面的差异,以及制得的米发糕品质的差异。首先,通过单一球磨、挤压
羊绒纤维是一种稀有的特种动物纤维,因产量稀少且具有纤细柔软和色泽温和等优良的特性,在纺织加工行业具有极大的商业价值。虫卵壳是羊绒纤维中难以去除的生物性杂质,因其对染料亲和性较羊绒纤维更高,且在染色过程中易造成染料堆积,染色后会形成局部斑点的现象,大大降低羊绒织物的品质。本论文建立了多酶复配去除羊绒纤维中虫卵壳杂质的全新方法,以几丁质酶、几丁质结合蛋白、蛋白酶和角质酶构成的复合酶降解体系,在较优降解