论文部分内容阅读
目的：B23(Nucleophosmin，NPM，numatrin，NO38)是一种多功能的核仁磷酸化蛋白，在细胞生长和增殖中发挥重要的作用。过去研究还表明B23可能是癌基因，在一些肿瘤中呈过表达。肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)是一种细胞生长活跃且死亡率高的恶性肿瘤。本研究拟用逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-PCR，RT-PCR)、免疫印迹(WesternBlot)及免疫组织化学等技术，通过比较增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)表达，探讨B23在肝细胞癌组织中的表达及其临床病理意义。
材料和方法：收集中山大学肿瘤防治中心手术切除的10对新鲜肝细胞癌组织及对应的癌旁肝组织，于-80℃冰箱保存，用于抽提RNA及蛋白。RT-PCR检测B23mRNA在HCC组织及癌旁肝组织中的表达水平。WesternBlot检测B23蛋白和PCNA蛋白在HCC组织及癌旁肝组织中的表达水平。另收集中山大学肿瘤防治中心有病理档案资料的肝手术病例：103例HCC，12例肝局灶性结节性增生，17例肝血管瘤。免疫组织化学法检测B23蛋白和PCNA蛋白在HCC组织及癌旁肝组织、肝局灶性结节性增生组织及血管瘤周围肝组织的表达水平及其与临床病理特征(患者性别、年龄、临床分期、肿瘤大小、肿瘤数量、血清AFP水平、HBsAg状况、肿瘤病理分级及是否伴有肝硬化)的关系。每例数1000个细胞，分为4种染色强度，即：(-)、(+)、(++)、(+++)。分别计算每种强度的百分比，转换成Ridit值代表其表达水平。采用SPSS12.0统计软件包进行数据处理。
结果：1、B23在肝细胞癌组织中的高表达(1)逆转录PCR结果表明B23mRNA在HCC组织中的表达明显高于对应的癌旁肝组织。10对HCC组织及对应癌旁肝组织均可检测到B23mRNA条带，B23mRNA在HCC组织中的表达强度是对应的癌旁肝组织的1.499倍。
(2)免疫印迹结果表明B23蛋白在肝细胞癌组织中的表达明显高于对应的癌旁肝组织。10对HCC组织及对应癌旁肝组织均可检测到B23蛋白条带，B23蛋白在HCC组织中的表达强度是对应的癌旁肝组织的2.673倍。
(3)免疫组织化学结果表明B23蛋白在HCC组织中的表达强度明显高于癌旁肝组织、肝局灶性结节性增生组织及血管瘤周围肝组织。ANOVA分析表明，这四组间B23表达水平的差异有明显统计学意义(P＜0.001)。t检验结果表明，B23在HCC组织中的表达强度明显高于其余三组(P＜0.001)。
2、B23蛋白与PCNA蛋白在HCC组织中的表达比较及其与临床病理特征的关系
(1)免疫印迹结果表明B23蛋白和PCNA蛋白的表达在HCC组织中均明显高于对应癌旁肝组织中的表达。免疫组织化学结果表明B23蛋白与PCNA蛋白在HCC组织中的表达均明显高于癌旁肝组织、肝局灶性结节性增生组织和血管瘤周围肝组织。统计分析表明PCNA在四组组织中表达水平的差别具有明显统计学意义(P=0.000)，PCNA在HCC组织中的表达强度明显高于其他三组(P＜0.001)。进一步分析表明B23与PCNA在这四种组织中表达强度具有相关性(r=0.4767，P＜0.001，R2=0.5639)。
(2)B23蛋白的表达强度与患者血清AFP水平、肿瘤病理分级和是否伴有肝硬化之间的关系有统计学意义(P＜0.05)；而与HCC患者性别、年龄、临床分期、肿瘤大小、肿瘤数量及HBsAg之间的关系未见统计学意义(P＞0.05)。PCNA蛋白的表达强度与患者性别、年龄、临床分期、肿瘤大小、肿瘤数量、血清AFP水平、HBsAg状况、肿瘤病理分级及是否伴有肝硬化之间的关系均未见统计学意义(P＞0.05)。
结论：1、Nucleophosmin/B23在肝细胞癌组织中呈高表达且显著高于非癌肝组织。
2、B23可作为肝细胞癌细胞增生程度的潜在标记物，并在临床病理上具有潜在的应用意义。