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第一部分MAGE-A11在食管鳞状细胞癌组织中的表达及预后意义目的:探讨MAGE-A11在食管鳞癌组织和对应癌旁正常食管上皮组织的表达及与临床生物学指标之间的关系及其预后关系。方法:应用蛋白组织芯片和免疫组织化学法检测106例食管鳞癌组织和对应癌旁正常食管上皮组织中MAGE-A11蛋白的表达,分析其与临床生物学指标之间的关系,及其预后关系。结果:1.在106例食管鳞癌组织中MAGE-A11蛋白表达阳性率占56.6%(60/106),MAGE-A11不在正常食管上皮组织中表达。2.MAGE-A11蛋白表达与食管鳞状细胞癌患者的年龄、性别和肿瘤部位不相关(P>0.05)。MAGE-A11蛋白表达与食管鳞状细胞癌患者的组织学分级、TNM分期、肿瘤浸润性、淋巴结转移、远处转移或复发呈正相关(P<0.05)。3.MAGE-A11蛋白表达阳性的食管鳞状细胞癌患者5年总生存率显著低于其表达阴性的患者(P<0.001)。4.Cox回归数据分析表明,MAGE-A11蛋白表达、淋巴结转移、TNM分期是影响食管鳞癌患者预后不良的独立因素。第二部分MAGE-A11在食管鳞状细胞癌进展中的表观调控机制研究目的:检测食管鳞癌细胞株Eca109、Ec9706、TE1、TE13、KYSE30、KYSE170的MAGE-A11的表达,研究表观遗传学对食管鳞癌细胞中MAGE-A11的转录调控机制。方法:1应用qRT-PCR检测6种食管鳞癌细胞株中MAGE-A11mRNA的表达。2应用qRT-PCR检测5-Aza-CdR(DAC)的处理对6种食管鳞癌细胞株中MAGE-A11mRNA的表达影响。3应用BSP分析食管鳞癌细胞株和正常食管上皮细胞的MAGE-A11启动子区CpG岛的甲基化水平。4应用Western Blot、免疫染色、CHIP方法分别分析TFCP2和ZEB1与MAGE-A11启动子的相关性。5应用qRT-PCR、Western Blot方法分别分析转染TFCP2和ZEB1对MAGE-A11表达的影响。6应用CCK8方法分别分析转染TFCP2和ZEB1对细胞增殖的影响。7应用qRT-PCR、Western Blot、CHIP方法分析组蛋白乙酰化修饰对MAGE-A11转录调控作用。结果:1.qRT-PCR结果显示6种食管鳞癌细胞系中,Eca109和KYSE30细胞系的MAGE-A11mRNA相对低表达,而TE13细胞显示相对高表达(P<0.05)。2.qRT-PCR结果显示6种食管鳞癌细胞系经DAC处理后MAGE-A11 mRNA有不同表达水平。在MAGE-A11低表达的细胞,通过DAC处理后可以诱导表达增加,而MAGE-A11高表达细胞仅有轻微的诱导(P<0.05)。3.BSP克隆测序结果显示MAGE-A11启动子区域–140bp到+1bp包括15个CpG位点,其中包含与转录因子SP1集群结合的10个Cp G位点,与TFCP2/ZEB1结合的3个CpG位点。TFCP2/ZEB1结合区的甲基化率均高于SP1结合集群的甲基化率。ESCC细胞的MAGE-A11启动子呈现超甲基化状态,经DAC处理后,这些CpG位点显著呈去甲基化状态。4.Western Blot、免疫染色、CHIP方法结果显示在ESCC中转录因子TFCP2和ZEB1以甲基化依赖性的方式直接结合到MAGE-A11启动子的CpG位点(P<0.05)。5.qRT-PCR、Western Blot结果显示过表达TFCP2和ZEB1促进MAGE-A11基因的转录,DAC处理可提高转录因子诱导MAGE-A11的表达(P<0.05)。6.CCK8结果显示过表达MAGE-A11增加细胞的增殖能力,TFCP2和ZEB1通过其调控MAGE-A11的转录可以诱导食管癌细胞的增殖能力,敲低MAGE-A11后,这些转录因子不能增加细胞的增殖能力(P<0.05)。7.qRT-PCR、Western Blot、CHIP结果显示MeCP2结合到MAGE-A11启动子高甲基化区域,抑制MAGE-A11mRNA和蛋白表达;敲低MeCP2可以增加DAC诱导MAGE-A11mRNA和蛋白表达;组蛋白去乙酰化酶HDAC1可以结合到MAGE-A11启动子区高甲基化区域,抑制基因表达;组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA可以增加DAC诱导MAGE-A11mRNA和蛋白表达。结论:1.MAGE-A11可以作为食管鳞状细胞癌患者预后不良的生物标记物。2.在食管鳞癌细胞中通过DNA甲基化和组蛋白乙酰化调控MAGE-A11的转录表达。