目的：1.观察经皮三叉神经电刺激（TcTNS）对匹罗卡品诱发的癫痫持续状态（SE）所致海马神经元损伤的保护作用。2.观察观察经皮三叉神经电刺激（TcTNS）对匹罗卡品诱发的慢性癫痫模型大鼠海马神经元GAD65/67表达的影响，以探讨经皮三叉神经电刺激治疗癫痫及脑保护作用的可能机制。资料和方法：实验一：选用健康成年雄性SD大鼠，采用随机数字表法将大鼠随机分为二组，匹罗卡品模型组和对照组，模型组用匹罗卡品诱导癫痫点燃模型，对照组注射等量的生理盐水，经过行为学观察两周后，具有慢性癫痫自发性再发作的为模型制备成功大鼠，再将模型制备成功大鼠采用随机数字表法分为两组，治疗组和模型组，分别给予三叉神经电刺激和假刺激一个月（刺激参数为频率140Hz,电流10mA,脉宽0.5ms，正向脉冲刺激30s间歇5min，连续刺激1h，假刺激组各项参数均为0。刺激时间定为每天12:00-16:00）后终止刺激，再次注射皮罗卡品诱导一次癫痫持续状态（SE）并于SE后24h,48h,72h处死大鼠并取材，对照组亦在相应时间点取材，采用TUNNEL和NISSEL染色观察各组大鼠海马神经元细胞的凋亡和坏死情况。组间比较采用配对t检验，以p﹤0.05定义为差别有统计学意义。实验二：选用健康成年雄性SD大鼠，采用同实验一的方法建立癫痫点燃模型，将慢性癫痫模型制备成功者用随机数字表法分为模型组与治疗组，分别给予三叉神经电刺激与假刺激一个月（刺激参数及时间同实验一），于停止刺激后24h，72h，一周，二周，四周处死大鼠并取材，对照组亦于相应时间点取材。采用免疫组化的方法研究大鼠海马及皮层GAD65、67的表达情况，组间比较采用配对t检验，组内比较采用单因素方差分析，以p﹤0.05定义为差别有统计学意义。结果：1．在实验一中：1.1TUNNEL染色：SE后各时间点治疗组和模型组均可见TUNNEL阳性细胞，主要分布在海马的CA1和CA3区，SE后24h，48h，72h治疗组CA3区的TUNNEL阳性细胞较模型组显著减少（p＜0.05），以72小时尤为明显（p＜0.01）正常对照组可见少量TUNNEL阳性细胞。1.2NISSEL染色：正常对照组显示海马CA1和CA3区神经元细胞排列整齐紧密，没有明显的神经元缺失，细胞核呈圆形或椭圆形，胞浆内尼氏小体丰富。模型组各时间点可见不同程度的神经元丢失，部分神经元胞体皱缩，胞浆深染，核固缩，锥体细胞存活数较正常细胞减少，尤以72小时最为明显（p＜0.01）。经皮三叉神经刺激治疗组各时间点大鼠海马CA1，CA3区神经元细胞尚清晰完整，部分细胞出现染色质凝集，神经元丢失情况较模型组显著下降，即治疗组Nissl染色细胞数显著多于模型组（p＜0.05）。2.在实验二中：2.1：海马区及皮层均有GAD65的阳性细胞表达，尤以海马的CA3区表达最为明显，主要在胞核中表达，阳性细胞为棕红色颗粒，经皮三叉神经刺激治疗组较假刺激组相比，各时间点治疗组阳性细胞表达均高于模型组（p＜0.05），治疗组GAD65的表达于停止刺激后72小时-7天达到高峰，较模型组有极显著差异（p＜0.01）。后GAD65的表达下降，至28天接近正常表达水平。2.2：海马区及皮层均可见GAD67阳性细胞，在海马的CA3区及DG区表达最为明显，主要在胞浆中表达，与模型组各时间点相比较，治疗组的表达远大于模型组（p＜0.05）。组内比较发现，GAD67无明显的时间变化趋势，至停止刺激后28天，治疗组的GAD67的表达仍大于正常水平。结论：1.经皮三叉神经电刺激治疗可以减少癫痫大鼠海马神经元的损伤，从而发挥对癫痫大鼠海马神经元的保护作用。2.经皮三叉神经电刺激可使癫痫大鼠脑内抑制性神经递质的标志物GAD65/67表达上调，,抑制性递质的增强可能为三叉神经电刺激治疗癫痫及发挥脑保护作用的机制之一。