黄芩毛状根的诱导及黄芩苷分离纯化的研究

被引量 : 3次 | 上传用户:nmghdw126com
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
黄芩为唇形科(Labiatae)植物黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的干燥根,是常用中药,性寒、味苦。具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎等功效。黄芩多见于阳光充足的向阳山坡、林缘、稀疏草丛中,耐热、耐寒、耐旱、忌积水,-35℃安全越冬,能耐35℃的高温。黄芩的主要有效成分黄芩苷(Baicalin),是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物,具有显著的生物活性。近年来,黄芩的药用量逐年上升,有限的野生资源遭到了掠夺性采挖,资源短缺使其价格居高不下。黄芩毛状根的培养将使黄芩苷生产实现工业化,有着重要的经济价值。本课题运用遗传转化和组织培养技术,采用共培养法,利用发根农杆菌(Agrobacterizum rhizogenes)1.2556中的Ri质粒侵染不同的黄芩外植体,诱导产生毛状根。并探讨了转化过程中外植体、预培养、侵染时间、乙酰丁香酮等因素对毛状根诱导率的影响。在单因素实验的基础上,利用Box-Benhnkcn设计和响应面分析法对培养时间、培养温度、摇床转速、接种量等影响培养条件的因素进行分析,建立黄芩毛状根的离体培养体系。对Ri质粒介导的黄芩毛状根中的黄芩苷应用大孔吸附树脂进行分离与纯化,纯化后的黄芩苷用高效液相色谱法进行检测。研究表明,通过共培养法实现了黄芩毛状根的遗传转化。毛状根密集簇生,无向地性,普遍水平生长,在无外源激素的MS培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。外植体黄芩茎段、根段等均能产生毛状根,但茎段诱导率最高,可达到47%。黄芩外植体预培养两天,侵染时间为10-15min,添加100μmol/L的乙酰丁香酮,共培养两天最佳。在MS培养基中加入400mg/L抗生素头孢曲松钠能较好地抑制发根农杆菌生长,提高黄芩外植体的诱导率。通过对毛状根鲜重量的比较,优化出毛状根的最优培养条件为:1/2MS培养基中,加入30g/L蔗糖,pH值6.0、培养时间25d、温度27.4℃、摇床转速123r/min、接种量0.5g,黑暗下培养,有利于毛状根生长及次级代谢产物黄芩苷的生物合成。通过大孔吸附树脂法对黄芩毛状根提取液进行分离与纯化,确定黄芩毛状根提取液中含有黄芩苷;运用HPLC对纯化后的黄芩苷检测表明,培养25天的黄芩毛状根中黄芩苷的含量可达5.37%。
其他文献
本文将小组合作学习引入了初中英文写作教学,并对其实施效果进行了研究,结果表明小组合作学习有利于提高学生的写作能力、改善学生学习态度并能促进教师的自我提高;本文还对
<正> 如何正确处理党际关系,始终是马克思主义党的学说和国际共产主义中的重大的理论实践问题。中国共产党历来都十分重视党际关系问题,特别是作为第二代领导集体核心的邓小
会议
森林作为最大的陆地生态系统,具有丰富的物种资源和高效的生态功能,森林生态系统的保护和恢复建设是改善宏观生态系统的重要手段,而人工林和次生林已成为世界森林资源的重要
萨瓦剧院是伦敦西区的著名剧院,曾因“萨瓦歌剧”缔造了百年传奇。不论是英国的歌剧,还是美国百老汇的音乐剧,都深受“萨瓦歌剧”影响,因此萨瓦剧院在英美演剧史上有着重要地
主谓谓语句作为汉语一个很有特点的句式,一直是汉语语法学界关注的重点,也是二语学习者习得的难点句式之一。该句式的本体研究成果丰硕,但是在习得偏误及习得顺序方面的研究
目的:了解某院抗真菌药物氟康唑(fluconazone)的使用情况,促进氟康唑的合理使用。方法:采用回顾性分析方法,汇总2013年1月-2014年6月使用该药的儿童住院患者,共计评价171例次
启动全方位的病虫害治理方案《植物医院》栏目旨在架起农民和科技工作者的信息桥梁,以倡导全新的病虫害防治理念为己任,为您的丰收加个保险。如果您是科技第一线的工作者,您
目的:观察食管康颗粒对反流性食管炎(RE)模型大鼠血清T3、T4、FT3、FT4含量的影响。方法:将64只Wistar大鼠,雌雄各半,随机分成4组,即正常对照组(正常组)、食管康颗粒组(食管
建立科学合理的员工绩效考核方案可以最大程度地提高员工的工作积极性,提升员工的忠诚度和满意度,为企业效率的提高提供动力和源泉。而制药企业生产部员工特点更是决定了员工
<正>认识艾薇塔缘于张靓颖唱过的一首歌《阿根廷别为我哭泣》,那是我十分喜爱的一首歌曲,曲风充满了南美音乐的热情奔放与流行音乐的柔美抒情,想必也打动过许许多多的人。那