【摘 要】
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目的：对海藻酸钠立体培养与单层培养的兔膝关节软骨细胞力学特性进行量化分析,为软骨组织工程治疗软骨损伤提供实验证据。方法：二月龄新西兰白兔8只,雌雄不限。无菌条件下,分离
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目的：对海藻酸钠立体培养与单层培养的兔膝关节软骨细胞力学特性进行量化分析,为软骨组织工程治疗软骨损伤提供实验证据。方法：二月龄新西兰白兔8只,雌雄不限。无菌条件下,分离双膝关节软骨细胞,随机分为两组,一组细胞以传统方式单层培养,一组细胞以4×106／m1浓度与海藻酸钠混合,通过硅胶盘模制成圆形柱状细胞盘(25μ1／个),CaCl2溶液中凝胶化5分钟,DMEM/F12无血清培养基加20%FBS(fatal blood solution)于6孔培养板中培养。于1、2、4周(1W、2w、4W)提取软骨细胞。利用流式细胞仪测定单层培养与立体培养1w、2w及4w软骨细胞的凋亡情况。两种培养方式均采用半无限体模型(Half-space model)结合微管吸吮技术分析软骨细胞的黏弹指数(瞬时模量E0、平衡模量E∝、表观黏性μ)。结果：1、与单层培养的兔膝关节软骨细胞相比,海藻酸钠立体培养的软骨细胞凋亡率和活细胞率无明显差异(p>0.05)；2、单层培养和海藻酸钠立体培养软骨细胞表现均为典型的黏弹性固体蠕变特征；3、与单层培养的兔膝关节软骨细胞相比,海藻酸钠立体培养的软骨细胞黏弹性明显较高,差异有统计学意义(P<0.005)。4、海藻酸钠立体培养4w时软骨细胞黏弹性明显低于1w,2W,差异有统计学意义(P<0.005)。结论：1.流式细胞仪检测,单层培养与立体培养的软骨细胞凋亡率和活细胞率均符合软骨种子细胞量。2.单层培养的兔膝关节软骨细胞与立体培养兔膝关节软骨细胞均表现出典型的黏弹性固体蠕变特征。3.通过微管吸吮力学测量海藻酸钠立体培养软骨细胞的力学特性相对较稳定,适合作为构建组织工程化软骨的种子细胞。
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