斑鸠菊属植物咸虾花抗肿瘤活性成分研究

来源 :武汉轻工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wyt_2010
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咸虾花(Vernonia patula Merr.)是斑鸠菊属植物中数量较为庞大,分布较为广泛,比较常见的一种植物。相关药理学研究表明,咸虾花具有较强的抗肿瘤细胞活性。本论文在探寻咸虾花抗肿瘤活性化合物的基础上,进一步对咸虾花进行较为系统的研究,实验通过利用MTT比色法筛选出咸虾花的抗肿瘤活性部位,再使用多种现代色谱分离技术对活性部位进行分离纯化以得到纯度高的单体化合物,并进一步研究测试单体化合物的抗肿瘤活性,在此基础上,研究咸虾花提取工艺及质量标准方法,为今后咸虾花作为一种中草药综合开发与利用奠定理论基础。本实验初步通过小试实验研究,筛选出咸虾花抗肿瘤活性部位。用98%工业乙醇提取少量咸虾花粗粉,醇提液冷凝浓缩后依次使用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇4种试剂萃取分别得到4个部位的浸膏,醇提后的咸虾花晒干后继续用水提取,水提液浓缩后得到水部位浸膏;利用MTT法分别测定各个部位对人肝癌细胞、人胃癌细胞、人乳腺癌细胞的增殖抑制作用。结果表明,咸虾花的乙酸乙酯部位对3株人肿瘤细胞具有较强的增殖抑制作用,是抗肿瘤活性的最佳部位。为能够最大量的得到乙酸乙酯部位,有利于该部位化学成分的分离纯化,本部分实验以咸虾花粗提物质量作为参考标准,通过单因素实验设计研究乙醇浓度、料液比、提取时间、提取次数这4个因素对粗提物质量的影响,建立四因素三水平的正交试验设计探索影响咸虾花提取效果的各因素大小关系,并确定最佳提取方案。结果表明,影响咸虾花提取效果的各因素大小为料液比>乙醇浓度>提取次数>提取时间,咸虾花的最佳提取方案为90%乙醇、料液比1:10、提取时间30min/次、提取次数3次。为研究乙酸乙酯部位的化学成分,实验利用正相硅胶柱层析、反相硅胶柱层析(ODS)、大孔吸附树脂(D101)、凝胶柱层析(Sephadex LH-20)等对乙酸乙酯浸膏进行反复分离纯化,再结合理化性质及波谱学数据鉴定化合物结构,分离鉴定得到4个单体化合物,分别为2-壬烯(2-nonene I)、8?-(3-chloro-2-hydroxy-2-methylpropanoyloxy)hirsutinolide(II)、亚油酸(linoleic acid III)、(2S,3S,4R,10E)-2-[(2R)-2-羟基二十四烷酰氨基]-10-十八烷-1,3,4-三醇((2S,3S,4R,10E)-2-[(2R)-2-hydroxytetradecanoylamino]-10-octadecane-3,4-triol(IV)。利用MTT法依次测验4个单体化合物I、II、III、IV的抗肿瘤活性,结果表明8?-(3-chloro-2-hydroxy-2-methylpropanoyloxy)hirsutinolide(II)和(2S,3S,4R,10E)-2-[(2R)-2-羟基二十四烷酰氨基]-10-十八烷-1,3,4-三醇(IV)对3株人癌细胞均具有较好的抑制活性,是乙酸乙酯部位中抗肿瘤活性成分的主要物质组成部分。实验建立咸虾花质量标准,以(2S,3S,4R,10E)-2-[(2R)-2-羟基二十四烷酰氨基]-10-十八烷-1,3,4-三醇(IV)为对照品,采用苯甲酰化-紫外检测法,在精密度试验、稳定性试验、重复性试验及加样回收率的测定上做进一步分析研究,对咸虾花提取物中(2S,3S,4R,10E)-2-[(2R)-2-羟基二十四烷酰氨基]-10-十八烷-1,3,4-三醇的含量进行了测定。结果表明,其在8~128μg/mL范围内线性关系良好,线性回归方程为y(28)12.423x(10)14.486(R~2(28)0.999),咸虾花提取物中其含量为0.086μg/mg,平均加样回收率为97.56%,RSD为1.02%。
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