截短型人AIF分子的基因克隆、表达及对肿瘤细胞杀伤作用研究

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本研究用PCR的方法构建了四种截短型AIF基因,将四种截短型AIF基因克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,经DNA测序,证实获得序列正确。将带有编码成熟型AIF基因的载体与四种截短型AIF基因载体分别瞬时转染人宫颈癌HeLa细胞,通过Westernblot、免疫组化染色等证实了四种截短型基因在细胞中的表达。荧光显微镜可观察到,截短型AIF分子表达于细胞浆中,与转染空载体组相比,四种截短型AIF分子的表达后,HeLa细胞有细胞膜出泡,细胞核不均一等形态学变化。同时间接免疫荧光显示,表达的AIF分子可诱导Cyt c的释放。 为了进一步比较四种截短型AIF分子的促凋亡活性,将四种截短型AIF基因亚克隆到真核诱导表达载体pIND中,经过酶切鉴定,证实获得序列正确。将四种截短型AIF分子稳定转染人乳腺癌SKBR-3细胞和人宫颈癌HeLa细胞,筛选建株。 综上所述,四种表达的人截短型AIF分子均具有促凋亡活性。其中,仅含C-末端结构域的最短形式AIF△1-480位氨基酸后,仍具有促凋亡活性。 与成熟AIF分子相比,截短型的AIF分子具有分子小的特征,更有利于进入肿瘤细胞临床研究,本研究为将其应用于肿瘤治疗奠定了理论基础。
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