白藜芦醇通过GIPC2表达调控wnt信号通路影响前列腺癌的转移

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiaxing19871215
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背景:前列腺癌(PCa)是男性生殖系统最常见的癌症,其发病率和死亡率正在增加,在中国,也有类似的趋势,仍然是男性第二大常见死亡原因。PCa是一个临床异质性和多特点的癌症。在过去10年中,已对多种新型疗法的深入研究和开发,大多数前列腺癌患者被诊断为晚期,早期诊断前列腺癌是改善中国前列腺癌患者生存的关键。由于表观遗传沉默,GIPC2在急性淋巴细胞白血病中下调,而GIPC2在雌激素诱导的乳腺肿瘤中上调。GIPC2的体细胞突变发生在恶性黑素瘤、结肠直肠癌和卵巢癌中。GIPC2在胃癌中表达上调,而在肾癌,急性淋巴细胞白血病(ALL)和肾上腺皮质癌中下调,GIPC2基因启动子区域内的Cp G岛在所有23种白血病细胞系中均高度甲基化。目的:探索前列腺癌细胞系中GIPC2蛋白表达量,以及GIPC2蛋白表达对前列腺癌细胞迁移、侵袭、以及增殖的影响,为前列腺癌临床用药寻找新靶点,同时筛选出能够靶向GIPC2蛋白的中药单体。方法:本研究分为两个阶段1.GIPC2对前列腺癌细胞的影响的研究。前列腺癌细胞系(Du145、C42、PC3)和前列腺上皮细胞RWPE1提取细胞总蛋白,做western blot检测细胞系中GIPC2表达量。随后,将前列腺癌细胞系(Du145、C42、PC3)分为实验组和对照组,实验组细胞转入小干扰RNA将GIPC2敲低,对照组细胞不做处理或者转入空载RNA;将前列腺上皮细胞(RWPE1)分为实验组和对照组,实验组细胞中转入质粒DNA将GIPC2高表达,对照组转入空载质粒DNA。各个细胞系的实验组和对照组细胞同时进行伤口愈合实验、Transwell、微流控芯片、CCK8或者EDU,分别检测细胞迁移、侵袭、凋亡和增殖能力。将RWPE1细胞中GIPC2高表达,做免疫荧光共定位,检测GIPC2蛋白表达。将RWPE1细胞分为实验组和对照组,实验组细胞转入质粒DNA将GIPC2蛋白过表达,对照组细胞转入空载质粒DNA,做微流控芯片,检测实验组和对照组细胞侵袭能力。2.白藜芦醇对前列腺癌细胞中GIPC2水平调控的研究。首先用CCK8检测白藜芦醇在前列腺癌细胞系(Du145、RWPE1)中的生长抑制率及48h IC50,并用所得的48h IC50处理细胞,用western blot检测细胞中GIPC2蛋白水平。结果:1.GIPC2在高转移性前列腺癌细胞Du145、C42中表达最多,在PC3细胞中表达量较多,GIPC2表达随着肿瘤的恶性程度升高而增加。2.与正常前列腺上皮细胞RWPE1中相比,前列腺癌细胞系Du145、PC3、C42中的GIPC2蛋白水平均上调。3.GIPC2上调促进RWPE1细胞迁移和侵袭能力,GIPC2下调抑制Du145、PC3细胞迁移和侵袭能力。4.GIPC2下调对Du145、C42的增殖和凋亡能力无明显影响。5.GIPC2既存在于细胞核也存在于细胞质。6.白藜芦醇对前列腺癌细胞Du145迁移和侵袭无显著影响,对GIPC2过表达的RWPE1细胞迁移和侵袭无明显影响。结论:1.GIPC2在前列腺癌细胞中高表达2.GIPC2上调促进前列腺癌细胞的迁移和侵袭3.GIPC2不涉及对前列腺癌细胞增殖的影响4.白藜芦醇不影响前列腺癌细胞转移
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